[发明专利]一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法

权利要求书

1.一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：包括(一)再生体系建立，采用添加6-BA和NAA的培养基对茎瘤芥外植体进行诱导，获得茎瘤芥再生体系；(二)遗传转化体系建立，取无菌外植体置于含农杆菌的浸染液中浸染，并将浸染后的外植体经添加6-BA、NAA和抗生素的培养基进行诱导，获得茎瘤芥遗传转化体系。

2.根据权利要求1所述的一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：所述再生体系建立具体包括如下步骤：

S1：播种，取灭菌的茎瘤芥种子播种于种子萌发培养基M₁中；

S2：愈伤诱导，切取播种所得茎瘤芥的部分组织作为外植体接种于愈伤组织诱导培养基M₂中，诱导获得愈伤组织；

S3：不定芽诱导，将S2所得愈伤组织接种于新的愈伤组织诱导培养基M₂中继续培养，获得不定芽；

S4：生根诱导，将S3中所得不定芽接种于生根培养基M₃中进行生根培养，获得再生苗；

S5：炼苗，将再生苗移栽至营养土中，获得再生植株，建立茎瘤芥再生体系；

所述种子萌发培养基M₁为1/2MS培养基；

所述愈伤组织诱导培养基M₂为MS培养基+6-BA+NAA；

所述生根培养基M₃为1/2MS+NAA。

3.根据权利要求2所述的一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：所述茎瘤芥的品种为永安小叶，所述外植体为子叶。

4.根据权利要求3所述的一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：所述M₁、M₂中6-BA的添加浓度为1～2mg/L、NAA的添加浓度为0.05～0.15mg/L；所述M₃中NAA的添加浓度为0.1mg/L。

5.根据权利要求4所述的一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：所述遗传转化体系建立具体包括如下步骤：

步骤一：播种，取灭菌的茎瘤芥种子播种于种子萌发培养基M₁中；

步骤二：浸染，将外植体置于含农杆菌的浸染液中浸染；

步骤三：愈伤诱导，切取播种所得茎瘤芥的部分组织作为外植体接种于愈伤组织诱导培养基M₂’中，诱导获得愈伤组织；

步骤四：不定芽诱导，将上述愈伤组织接种于新的愈伤组织诱导培养基M₂’中继续培养，获得不定芽；

步骤五：生根诱导，将上述不定芽接种于生根培养基M₃’中进行生根培养，获得再生苗；

步骤六：炼苗，将再生苗移栽至营养土中，获得再生植株，建立茎瘤芥遗传转化体系。

所述愈伤组织诱导培养基M₂’为MS培养基+6-BA+NAA+抗生素；

所述生根培养基M₃’为1/2MS+NAA+抗生素。

6.根据权利要求5所述的一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：所述浸染液为采用30％无菌蔗糖溶液重悬含有p130035S-BjuSPL10c-GFP载体的农杆菌。

7.根据权利要求6所述的一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：所述浸染为将外植体置于OD600值为0.05的浸染液中浸染10min。

8.根据权利要求7所述的一种基于农杆菌介导法的茎瘤芥高效遗传转化方法，其特征在于：所述浸染后还包括共培养，所述共培养为采用无菌滤纸将子叶表面多余农杆菌吸取后置于共培养基M₄中暗培养2天；所述M₄为MS+6-BA+NAA。