[发明专利]一种酶活高、稳定性好的重组人Cu、Zn-SOD及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及一种酶活高、稳定性好的重组人Cu、Zn‑SOD及其制备方法和用途，其编码基因的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，本发明提供的重组人Cu、Zn‑SOD的酶活比天然人Cu、Zn‑SOD的酶活高约一倍，酶活稳定性相对于天然人Cu、Zn‑SOD的稳定性高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种酶活高、稳定性好的重组人Cu、Zn-SOD及其制备方法和用途。

背景技术

超氧化物歧化酶(SOD，E.C.1.15.1.1)是机体活性氧自由基清除反应过程中第一个发挥作用的抗氧化酶，在延缓衰老以及其他由自由基引起的疾病方面有很好的预防和治疗功效。

目前已知的超氧化物歧化酶有4种类型：铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-0SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)和镍超氧化物歧化酶(Ni-SOD)，其中Cu、Zn-SOD广泛存在于大多数的哺乳动物和真菌等真核生物细胞质、叶绿体和过氧化氢酶体内，是自然界中分布最为广泛的一种超氧化物歧化酶，同时也是目前应用最为广泛的超氧化物歧化酶。

目前大多数超氧化物歧化酶(SOD)产品主要来源于动物血液、内脏等，由于原材料有限、纯化困难等原因，导致SOD的纯度低、产量少；特别是随着世界各地疯牛病、禽流感、口蹄疫以及由动物传播的SARS等恶性传染病的疫情不时发生，生产动物源血液制品的风险加大；此外，对产品纯度要求的提高也增加了生产成本。随着基因工程技术的发展，微生物、植物和动物等不同来源的SOD基因被克隆表达。然而，重组表达的SOD要么以无活性包涵体存在，要么存在活力低，容易失活，或者耐热性差等问题。

通过基因工程手段获得SOD，主要包括与其他蛋白融合表达，对人SOD做点突变，从其他物种中筛选高性能SOD等几种方式。

CN103789278A公布了一种新型PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白及其制备方法，该新型PTD4-Cu，Zn-SOD融合蛋白穿透细胞膜的效率非常高，从而使原本不能通过细胞膜的Cu，Zn-SOD转导至细胞膜发挥生物学功能。

CN102526712B公布了一种SOD-TAT融合蛋白在制备防治放射损伤药物中的应用。SOD-TAT不仅可消除细胞外的自由基，还可消除细胞内的自由基，此外，SOD-TAT还可以跨越血脑屏障，其放射防护效果的深度和广度远远强于现有临床使用的放射防护剂。

CN101603048B公布了一种真菌Cu_Zn-SOD的免分子伴侣的原核表达方法。CN104450632公布了一组可提高SOD耐热温度和热稳定性的氨基酸序列及其应用。它是一组来源于Geobacillus属的13个特殊嗜热Fe/Mn-SOD的N端氨基酸序列。

CN101525600B公布了一种提高重组人Cu，Zn-SOD活性蛋白产量的方法。该发明通将第6位和111位的半胱氨酸突变为丝氨酸，使得裂菌上清中的重组蛋白占重组蛋白总体表达的比例由40％提高到80％，并且从上清中纯化的突变体rhCu，Zn-SOD的比活性与上清中纯化的未突变rhCu，Zn-SOD的相当。然而，该专利并未对产物的稳定性进行研究。

有鉴于此，本领域仍需要继续研究酶活高、稳定性好的重组人Cu、Zn-SOD。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酶活高、稳定性好的重组人Cu、Zn-SOD，并同时提供其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明一方面提供一种重组人Cu、Zn-SOD，其编码基因的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示。

本发明还提供了一种重组人Cu、Zn-SOD，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示