[发明专利]一种膀胱癌生物标志物提取方法及膀胱癌诊断模型

说明书

本申请涉及一种膀胱癌生物标志物提取方法及膀胱癌诊断模型，本申请通过利用硅纳米线芯片接触上述尿液样本，对尿液代谢物进行吸附萃取，萃取吸附后，置于干燥真空环境中；对所述硅纳米线芯片的代谢物进行质谱采集，采集尿液代谢物的原始代谢谱，并对原始代谢谱进行预处理；通过预设的筛选方法，从原始代谢谱中筛选得到特征代谢物，并进行结构鉴定，得到特定的膀胱癌生物标志物基于尿液高通量代谢检测平台，挖掘尿液样本中膀胱癌相关的潜在生物标志物，实现膀胱癌的有效无创诊断。所建立的膀胱癌诊断模型，前处理简单，不需要复杂的代谢提取过程，检测速度快，可以用于未来大规模人群的肿瘤筛查。

技术领域

本公开涉及医学诊疗技术领域，尤其涉及一种膀胱癌生物标志物提取方法、膀胱癌诊断模型及其在膀胱癌诊断中的应用。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，80-90％的患者以肉眼血尿为首发症状。由于这种血尿一般不伴疼痛，而且程度多为洗肉水色，一段时间后可能会自行消失，所以患者容易忽略而延误就医。虽然膀胱镜检查是目前最直观有力的金标准，但其有创性往往成为横亘在患者面前的一道心理难关。尤其对于需要频繁复诊的高龄患者，每次膀胱镜检查都是一次痛苦的折磨。因此，挖掘新的诊断膀胱癌的生物标志物组对于早期治疗和改善预后具有重要意义，通过监控尿液中代谢物的水平，可以实现膀胱癌的无创诊断。

基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。由于具有高通量、高灵敏度及选择性等特点，已成为化学分析领域和生命科学领域非常有效的分析工具，尤其在医学领域的应用越来越为广泛和深入。经金属辅助刻蚀制备的硅纳米线具有垂直天线状的阵列结构，对紫外光具有良好吸收和传递效率，被广泛应用生物样本代谢检测。

现有技术中，通过尿液检测膀胱癌的手段主要有两个方面：

一、膀胱癌尿液诊断方面：

1.临床手段：

尿细胞学检测膀胱癌的敏感性为13％-75％，特异性为85％-100％。

2.市场技术：

达健生物研发转化的“人Twist1基因甲基化检测试剂盒”，在全国多中心开展的注册临床研究显示，该产品用于膀胱癌辅助诊断的灵敏度为88.08％、特异性为90.48％，总符合率达89.64％。基准医疗研发的“尿立检”，检测阴性准确率高达99.9％。目前也已有多种膀胱癌抗原(UBC)检测的试剂盒通过批准用于临床，国内代表商品有如瑞清生物UBC elisa试剂盒，梵太生物人膀胱肿瘤抗原(BTA)试剂盒，但有研究显示，尿膀胱肿瘤抗原检测易受血尿浓度的影响，建议联合其他诊断手段以提高膀胱癌筛查的准确度。

3.已有的专利：

(1)公开号CN109709220B公布了一种用于诊断膀胱癌的联合标志物，包括甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸，通过检测来自受试者的血清样品中上述联合标志物各自的浓度，基于二元逻辑回归方程计算所述联合标志物变量，再基于确定的截点值，判断所述受试者是否患有膀胱癌。

(2)公开号CN106770873B提供了一种膀胱癌诊断标志物，包括肌苷、N-乙酰基-N-2-甲酰基-5-甲氧基犬尿氨酸和磷脂酰丝氨酸(O-18:0/0:0)，通过检测人血清样品中联合标志物的浓度，可建立低级别与高级别膀胱癌的诊断指标，对膀胱癌进行准确、快速的诊断。

(3)公开号CN106546721B公布了一组用于诊断区分腺性膀胱炎和膀胱癌的血清生物标志物，其特征在于：包括甲基巴豆酰肉碱、花生四烯酸、溶血磷脂酰胆碱(18:2)和溶血磷脂酰胆碱(20:3)，可以用于无创诊断区分腺性膀胱炎和膀胱癌，克服膀胱镜检查的不足，有望代替活检，可以开发成诊断试剂或试剂盒。

二、质谱技术方面(MALDI-TOF MS应用于尿液检测)：