[发明专利]一种以金银花花药为外植体的再生方法

说明书

本发明涉及植物组织培养技术领域，提出了一种以金银花花药为外植体的再生方法，包括以下步骤：S1、制备愈伤组织诱导培养基M1、愈伤组织诱导培养基M2、分化培养基、生根培养基；S2、获取金银花外植体并灭菌，得到金银花花药；S3、将金银花花药于愈伤组织诱导培养基M1中培养后于愈伤组织诱导培养基M2继代培养至产生胚性愈伤组织；S4、将胚性愈伤组织进行分化培养至形成再生植株，将再生植株转接到生根培养基培养，得到金银花组培苗。本发明提供的培养方法可直接诱导金银花花药产生胚性愈伤组织，简化了生产步骤，缩短了成苗的时间。利用本发明得到的胚性愈伤组织和再生苗方法可用于金银花的基因编辑研究和新品种选育。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体的，涉及一种以金银花花药为外植体的再生方法。

背景技术

金银花(Lonicera japonica)，为忍冬科忍冬属植物，因花开初时为白色，两三天后变为黄色，黄白花同时存在，故名金银花。金银花是一种药食两用植物，是我国重要的传统大宗中药材，其主要有效成分为绿原酸和类黄酮等，具有清热解毒、消炎除火、保肝利胆等功效，用于治疗风热感冒、温病、咽喉肿痛肺炎、痢疾、痛肿溃疡等症，具有极大的市场需求。目前金银花的主要栽培方式为大田种植，扦插繁殖等，不仅育苗周期长、受季节限制、易感病菌，还易使金银花生长不良，药用有效成分积累减少，造成产品品质的下降。

前人关于金银花组培的研究，多以茎尖、茎段、芽等为外植体，已公开的发明专利申请号201110292502.2和201210509936.8就以茎段作为外植体进行金银花的快繁，且主要产生丛生芽，只在基部产生少量愈伤组织。经检索尚未见以金银花花药为外植体进行组织培养，并产生胚性愈伤组织的报道。另外，金银花作为忍冬科属植物，常用的植物生长调剂为主要为IBA、NAA和6-BA，本发明的植物生长调节剂组合在金银花组织培养过程中几乎未见报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明以金银花花药为外植体，通过调整诱导培养基成分、优化诱导培养条件等，最终提供了一种金银花花药培养直接诱导出胚性愈伤组织并生成植株的方法。

本发明的技术方案如下：

一种以金银花花药为外植体的再生方法，包括以下步骤：

S1、制备愈伤组织诱导培养基M1、愈伤组织诱导培养基M2、分化培养基、生根培养基；

S2、获取金银花外植体并灭菌，收集金银花花药；

S3、将金银花花药于愈伤组织诱导培养基M1中培养后，于愈伤组织诱导培养基M2继代培养至产生胚性愈伤组织；

S4、将胚性愈伤组织进行分化培养至形成再生植株，将再生植株转接到生根培养基培养，得到金银花组培苗。

作为进一步的技术方案，所述愈伤组织诱导培养基M1以MS为基本培养基，添加葡萄糖25～35g/L，植物凝胶2.0～3.0g/L，2,4-D 0.05～0.15mg/L，IAA0.1～0.5mg/L，KT0.05～0.15mg/L，并调pH值为5.8；

所述愈伤组织诱导培养基M2以MS为基本培养基，添加葡萄糖25～35g/L，植物凝胶2.0～3.0g/L，IAA0.1～0.6mg/L，KT 0.2-0.6mg/L，并调pH值为5.8。