[发明专利]免疫球蛋白G的定量检测方法

说明书

本发明属于检测领域，提供了一种免疫球蛋白G的定量检测方法，包括：前处理的步骤，以至少将检测对象中的酪蛋白去除，以得到样品；检测的步骤，使用二维色谱装置和检测器对所述样品进行定量检测，所述二维色谱装置包括一维色谱系统和二维色谱系统，其中，所述一维色谱系统包括免疫球蛋白G特异性亲和色谱柱以及馏分收集器，所述二维色谱系统包括抗体色谱柱，所述一维色谱系统与二维色谱系统通过多通阀组进行连接或切换，并且，所述检测的步骤中：所述样品中的免疫球蛋白G在所述免疫球蛋白G特异性亲和色谱柱中纯化后在所述馏分收集器中进行富集，进而通过所述二维色谱系统后被所述检测器检测。

技术领域

本发明属于检测领域，特别的涉及一种蛋白/肽物质的分离和分析检测领域，更具体涉及一种免疫球蛋白G的定量分析的方法，尤其是乳制品中免疫球蛋白G含量的定量分析。

背景技术

免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）是一种重要的免疫分子，能特异性识别和结合入侵的细菌和病毒等致病原，并介导补体活化、免疫调理等的免疫反应，在增强机体的免疫能力、防止细菌和病毒入侵等方面发挥重要作用，存在于血清、常乳和初乳中。

Igs是具有生物活性的乳清蛋白家族，与酪蛋白不同，在酸化至约pH 4.6时可溶。

初乳中主要的Ig是同种型IgG（80％）。这与血清IgG的区别在于两种亚类IgG1和IgG2的比率（IgG1:IgG2；初乳90:10，参见血清56:44），其中IgG1从血清中选择性转运到初乳中。初乳中的IgG高，在4天后迅速下降到与常乳中的IgG水平相当的水平。

随着含有 IgG 的产品逐渐增多，IgG 的检测方法也越来越受到关注。IgG具有独特的分子结构和生物活性，检测方法较复杂。目前流行的 IgG 的检测方法主要有分析产品中 IgG含量和 IgG 活性含量这两类方法。并且，对IgG的研究主要集中在其生物活性功能和与其他免疫球蛋白的分离上，对于食品（乳制品）中活性含量的检测报告的不多，IgG含量的检测主要基于免疫学检测法ELISA。

IgG是热不稳定的蛋白，在高于75ºC的温度下会迅速变性。为了保持它们的生理功能，必须使其不变性并保持其原始状态。测定牛乳IgG的含量，的目是利用IgG的含量将作为牛初乳的乳品与市售作为常乳的牛奶区分开。理想的检测方法是稳定、准确以及区分天然和变性IgG的能力。

此前，有一些标准如NY/T 2070-2011主要通过分光光度法检测牛初乳及其制品中免疫球蛋白G的含量；标准SN/T 3132-2012通过酶联免疫吸附法测定出口牛乳制品中免疫球蛋白G的含量。另外，尽管也有尝试用HPLC法选用反相键和色谱柱ZORBAX300SB-C18测定牛初乳中免疫球蛋白G的含量，但是以上标准或方法均只适用于牛初乳产品和添加了牛初乳成分的牛乳制品，同时有些方法也无法区分活性免疫球蛋白的含量。

目前，针对牛常乳及其制品中免疫球蛋白G的检测方法有T/TDSTIA 003-2021，通过Protein G亲和柱净化，高效液相色谱法检测牛奶中免疫球蛋白G的含量。

另外，引用文献1使用亲和液相色谱 (LC) 方法检测牛免疫球蛋白 G (IgG)，其使用具有偶联的Protein G的琼脂糖支持物作为固定相，以允许对初乳粉末中的 IgG 进行定量。

因此，总体看来，现有技术中对于免疫球蛋白含量的测定方法尚存在有操作复杂、时间较长、准确度低、适用性和可靠性不佳等缺点。

引用文献：

引用文献1：“Affinity liquid chromatography method for thequantification of immunoglobulin G in bovine colostrum powders”，David E JCopestake等，J AOAC Int. 2006 Sep-Oct;89(5):1249-56。

发明内容