[发明专利]一种免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株的制备方法及应用，涉及生物技术领域。该免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株的制备方法包括以下步骤：(1)将结核分枝杆菌H37Ra菌株和卡介苗BCG菌株进行原生质体融合，得到新型结核杆菌融合菌株；(2)所述新型结核杆菌融合菌株经过超声微气泡物理损伤，得到所述免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株；所述超声微气泡物理损伤采用的微气泡材料为氟碳质相变钠米粒。本发明应用超声微气泡物理损伤技术，研制出了免疫原性细胞死亡的结核杆菌融合菌株，该菌株经蛋白提取和纯化，可以应用于制备结核病疫苗和抗结核药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株的制备方法及应用。

背景技术

结核病(Mycobacterium Tuberculosis)是严重危害人类健康的重大传染病，有效防治和根除结核病的任务严峻而艰巨。自1921年以来，卡介苗是唯一广泛应用于结核病的预防的结核病疫苗。但目前研究发现，卡介苗(bacille calmette-guerin，BCG)对结核病的预防作用十分有限。在不同的人群，其免疫保护作用差异较大，效果不稳定(免疫保护率从0-80％不等)；给先天性免疫功能低下的人或后天获得性免疫力缺陷患者接种卡介苗后，还可能导致严重的播散性结核病；同时接种卡介苗后，还会对结核病患者的实验室诊断产生一定影响。在传统卡介苗已无法满足人类预防结核病需求的当下，仍未见任何在研结核病疫苗可以替代卡介苗而应用于临床预防。

结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株，是由人型结核分枝杆菌强毒株多次传代培养减毒后获得。其较BCG拥有更为完整的抗原结构，免疫原性强，且可以长期定植宿主体内，满足结核病疫苗基本要求。但其毒力较BCG强，安全性欠佳。

原生质体融合(Protoplast fusion)技术是于上世纪60年代发展起来的一项微生物育种技术。其特点是可以获得集双亲优良性状于一体的稳定融合子产物，达到基因层面的杂交目的。

免疫原性细胞死亡(immunogenic cell death，ICD)，是指细胞受到外界刺激发生死亡的同时，死亡的细胞仍保留有免疫原性，可介导机体产生相应的免疫应答，该过程称为免疫原性细胞死亡。

结合以上优势技术，研发一种免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株，可为研制新型、安全、高效的结核病疫苗奠定基础，对结核病的有效防治具有重要的科学价值和社会意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株的制备方法及应用，以解决上述现有问题，本发明应用超声微气泡物理损伤技术，研制出了免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株，该菌株可以应用于制备结核病疫苗和抗结核药物。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株的制备方法，包括以下步骤：

(1)将结核分枝杆菌H37Ra菌株和卡介苗BCG菌株进行原生质体融合，得到新型结核杆菌融合菌株；

(2)所述新型结核杆菌融合菌株经过超声微气泡物理损伤，得到所述免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株；所述超声微气泡物理损伤技术中采用的微气泡材料为氟碳质相变钠米粒。

进一步地，在步骤(2)中，超声条件为：1W/m²，2min。

本发明还提供一种上述的制备方法制备得到的免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株。

本发明还提供上述的免疫原性细胞死亡的新型结核杆菌融合菌株在制备结核病疫苗或抗结核药物中的应用。

本发明公开了以下技术效果：