[发明专利]一种多肽合成的方法

说明书

本发明公开了一种多肽合成的方法，涉及多肽合成技术领域。本发明通过片段法合成多肽，可以极大程度上缩短合成多肽的周期，例如合成70个氨基酸组成的多肽，能将合成时间从140h缩短至39h。通过分段合成，可以有效规避多肽合成后期合成困难的问题，避免由于氨基酸长度过长导致单个氨基酸无法成功反应至肽‑树脂上。本发明大幅提升了多肽合成的成功率。

技术领域

本发明涉及多肽合成技术领域，具体而言，涉及一种多肽合成的方法。

背景技术

现有的多肽合成技术是从多肽C端将氨基酸加载到树脂上，反向偶联，根据序列，逐次将每个氨基酸进行单独反应，直到反应至N端氨基酸后结束。70个氨基酸的多肽，即使在不复投的情况下，每2小时合成1个氨基酸，合成周期长达140小时。另外由于需要加载到树脂上，当多肽偶联到25个氨基酸左右就会导致反应难度增加，偶联困难。这也是40个氨基酸长度以上的多肽难以连接，难以合成的根本原因。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够简单、快速的合成多肽长肽的方法，该方法能够3天合成70长度的多肽，且可以有效避免发生多肽合成40个氨基酸之后的依次合成每个氨基酸的困难问题。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种多肽合成的方法，具体包括如下步骤：

将待合成多肽分为n个片段，n＝4-20，且每个片段包括10-15个氨基酸；

多片段同时合成：在多个树脂上按照Fmoc固相合成策略偶联合成多个片段；固相合成第1片段的流程图参照图1所示；

从树脂上将片段切割分离：待合成多肽的C端的第1个片段记为第1片段，N端的第n个片段记为第n片段，使得第2片段至第n片段从相应的树脂上切割分离；

羧基的活化：采用羧基活化剂对第2片段至第n片段共n-1个片段同时进行羧基的活化；

脱除偶联有第1片段的树脂上第1片段的Fmoc，得到肽-树脂组合物1；

然后将羧基活化后的第2片段反应到脱除Fmoc的第1片段的树脂上，得到肽-树脂组合物2；

对肽-树脂组合物2进行Fmoc脱除，然后将第3片段与肽-树脂组合物1混合反应，得到肽-树脂组合物3；

重复进行肽-树脂组合物的Fmoc脱除与新的肽-树脂组合物的合成反应，依次将第4片段-第n片段连接至肽-树脂组合物上；获得目标多肽。

发明人通过片段法合成多肽，可以极大程度上缩短合成多肽的周期，例如合成70个氨基酸组成的多肽，能将合成时间从140h缩短至39h。通过分段合成，可以有效规避多肽合成后期合成困难的问题，避免由于氨基酸长度过长导致单个氨基酸无法成功反应至肽-树脂上。本发明大幅提升了多肽的合成成功率。

Fmoc固相合成策略中，采用Fmoc基团对氨基进行保护，一方面Fmoc基团可被碱脱除，另一方面，Fmoc基团对酸稳定，可以耐TFA等强酸，且不受影响。此外，Fmoc基团有特征性的紫外吸收，易于监测反应的进行，给自动化合成多肽带来方便。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义；

Fmoc：芴甲氧羰基；

Fmoc-AA：芴甲氧羰基保护的氨基酸；

DIC：N，N′-二异丙基碳化二亚胺；

PyBOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷；

HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯；

HOBt：1-羟基苯骈三唑；