[发明专利]一种适用于嫁接愈合过程中韧皮部及木质部重连效率定量判断的方法

权利要求书

1.一种适用于嫁接愈合过程中韧皮部及木质部重连效率定量判断的方法，包括(1)育苗和嫁接；(2)嫁接愈合期管理；(3)配制CFDA溶液和EDTA·2Na溶液；(4)韧皮部及木质部重连效率定量判断。

2.如权利要求1所述方法，步骤(1)过程如下：对接穗与砧木种子浸种催芽后播种于32孔穴盘；当接穗子叶展平，砧木出现第一片真叶时进行嫁接，嫁接采用单子叶贴接。

3.如权利要求1所述方法，步骤(2)过程如下：嫁接后第1d黑暗，2-7d恒定弱光；嫁接后1-3d用闷养箱保持湿度，4-7d逐渐通风。

4.如权利要求1所述方法，步骤(3)中，CFDA即5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯溶液的配制：DMSO即二甲亚砜溶解为10mg/ml的母液，每1ml分装于1.5ml离心管，-20℃下避光保存；工作液现配现用，室温解冻，蒸馏水稀释为0.5mg/ml CFDA，-20℃避光保存。

5.如权利要求1所述方法，步骤(3)中，EDTA·2Na溶液的配制：取0.0931g EDTA·2Na溶解于100mL蒸馏水中，常温保存。

6.如权利要求1所述方法，步骤(4)中，韧皮部重连效率定量判断过程如下：

接穗预处理；荧光物质外源施加；荧光物质提取；

荧光强度测定：计算韧皮部重连效率用体式荧光显微镜进行观察，在488nm激发光下，分别观察接穗和砧木提取液中的荧光，用imageJ分析提取液荧光强度；韧皮部重连效率＝砧木提取液荧光强度/接穗提取液荧光强度。

7.如权利要求1所述方法，步骤(4)中，木质部重连效率定量判断过程如下：

砧木预处理；荧光物质外源施加；荧光物质提取；

荧光强度测定：计算木质部重连效率用体式荧光显微镜进行观察，在488nm激发光下，分别观察接穗和砧木提取液中的荧光，用imageJ分析提取液荧光强度；木质部重连效率＝接穗提取液荧光强度/砧木提取液荧光强度。

8.如权利要求1所述方法的应用，用来筛选利于嫁接苗生长的愈合环境温度或用来筛选利于嫁接苗生长的愈合环境光照条件或用来筛选利于嫁接苗生长的愈合环境湿度。

9.如权利要求8所述方法的应用，筛选出26℃的愈合环境温度相比22℃的愈合环境温度更有利于嫁接苗的生长。

10.如权利要求1所述方法的应用，用来筛选促进嫁接愈合的外源物质。