[发明专利]一种小鼠骨质疏松症模型的构建方法和应用

权利要求书

1.一种小鼠骨质疏松症模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)确定消除待敲除基因的特异性靶位点，利用Cre重组酶敲除Mapk7基因，构建纯合子Mapk7^fl/fl小鼠；

2)将纯合子Mapk7^fl/fl小鼠和Prx1-cre小鼠杂交，获得F1代Prx1-Cre/Mapk7^fl/wt小鼠，将F1代Prx1-Cre/Mapk7^fl/wt小鼠和纯合子Mapk7^fl/fl小鼠杂交，构建Prx1-Cre/Mapk7^fl/fl条件性基因敲除小鼠，利用特异性引物通过PCR的方法进行基因型的鉴定。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中，将含有Mapk7-loxP的打靶载体的胚胎干细胞转移至小鼠的囊胚，将囊胚移植到假孕的雌鼠子宫，获得嵌合体小鼠，将嵌合体小鼠和CAG-Dre工具鼠杂交，获得去除Neo基因的F1代杂合子Mapk7^fl/wt小鼠，再将F1代杂合子Mapk7^fl/wt小鼠自交，获得去除Neo基因的纯合子Mapk7^fl/fl小鼠。

3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述Mapk7-loxP的打靶载体的构建方法包括：在Mapk7基因的4号外显子上游的内含子序列中插入Rox-Neo-Rox-LoxP元件，在Mapk7基因的7号外显子中的终止密码子下游插入LoxP位点。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述特异性引物如SEQID NO：1-4所示。

5.如权利要求1-4任一项所述的构建方法获得的小鼠骨质疏松症模型用于研究Mapk7基因在其所参与的骨质疏松症疾病中的应用。

6.Mapk7基因在调控骨发育或骨代谢中的应用，其特征在于，通过构建如权利要求1-4任一项所述的构建方法获得的Prx1-Cre/Mapk7^fl/fl条件性基因敲除小鼠，获取Mapk7基因缺失后骨发育或骨代谢情况。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，Mapk7基因缺失抑制Wnt/β-catenin通路的活性。