[发明专利]一种沙眼衣原体重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本申请涉及基因工程技术领域，具体公开了一种沙眼衣原体重组蛋白及其制备方法和应用。本申请提供的沙眼衣原体重组蛋白的氨基酸序列由沙眼衣原体基因氨基酸序列和P2白喉毒素T细胞表位序列组成；所述沙眼衣原体重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；本申请还公开了利用该沙眼衣原体重组蛋白编码的基因以及含有上述基因的重组质粒、转化子和疫苗。本申请提供的沙眼衣原体重组蛋白具有优异的表达效果，且纯度能够达到90%以上。

技术领域

本申请涉及基因工程技术领域，具体涉及一种沙眼衣原体重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)是一类革兰阴性、专性细胞内寄生引起性传播感染(Sexually Transmitted Infection，STI)的重要病原体，可引起眼部、生殖道等多个系统疾病。根据CT表面外膜蛋白不同，可分为19种血清型，其中A～C血清型引起沙眼；D～K血清型主要引起泌尿生殖系统感染，包括男性的非淋菌性尿道炎和附睾炎、女性严重的并发症(如不孕不育、异位妊娠和慢性盆腔疼痛)；L1～L3血清型引起直肠感染。此外，CT与人类免疫缺陷病毒(human Immunodeficiency Virus，HIV)感染和传播率的显著增加有很大关系。

目前，对抗CT感染的主要方法是采用抗生素治疗配合对症治疗，当采用抗生素治疗时，由于抗生素的大量使用，会逐渐出现了耐药菌株，使得抗生素发挥的作用也越来越小，而且抗生素治疗可能会降低机体对抗CT免疫反应的持久性和产生抗体的能力，导致再感染率上升。因此，安全、有效的CT疫苗可能成为预防和控制CT感染最有效、最经济的方法，能够实现对易感人群的长期保护，减少传播并抑制继发性感染。然而，目前尚无有效的疫苗。

发明内容

为了提高沙眼衣原体重组蛋白的表达量，本申请提供一种沙眼衣原体重组蛋白及其制备方法和应用。

第一方面，本申请提供一种沙眼衣原体重组蛋白，采用如下的技术方案：

一种沙眼衣原体重组蛋白，所述沙眼衣原体重组蛋白的氨基酸序列包括沙眼衣原体基因氨基酸序列和P2白喉毒素T细胞表位序列。

本申请通过向沙眼衣原体基因氨基酸序列上引入P2白喉毒素T细胞表位序列，制得了一种沙眼衣原体重组蛋白，该沙眼衣原体重组蛋白具有优异的表达性能。此外，由于P2白喉毒素T细胞表位序列的引入，也显著增加了沙眼衣原体重组蛋白的T细胞反应，使得制得的疫苗能够兼顾T细胞应答与B细胞应答。

优选地，所述沙眼衣原体基因氨基酸序列为DEFGA或DEFGJ。

进一步地，所述沙眼衣原体重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

第二方面，本申请提供一种编码所述沙眼衣原体重组蛋白的基因。

第三方面，本申请提供一种重组质粒，所述重组质粒包含所述基因和表达载体。

第四方面，本申请提供一种包含所述基因的转化子。

第五方面，本申请提供一种沙眼衣原体重组蛋白的制备方法。

一种沙眼衣原体重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：合成基因、制备表达载体、制备重组质粒、诱导表达；

所述诱导表达的具体步骤为：将所述重组质粒转化宿主细胞，构建重组工程菌，通过诱导表达、分离纯化，即可获得所述沙眼衣原体重组蛋白。

本申请采用的载体为去除GST融合蛋白的Pgex-6P1载体。实验探究发现，利用去除GST融合蛋白的载体制得的重组质粒依然够诱导表达出沙眼衣原体重组蛋白。除此之外，GST融合蛋白的去除还节省了后续的处理步骤。

优选地，所述诱导表达的温度为18-30℃。