[发明专利]一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法及应用

权利要求书

1.一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，利用高分辨超高效液相色谱-质谱法，借助正离子模式和负离子模式对低温贮藏贡柑进行非靶标代谢组学分析。

2.根据权利要求1所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、对贡柑代谢物组分进行色谱分离：利用色谱柱对提取代谢物组分后的低温贮藏贡柑果皮或果肉进行分离，并分别采用正离子模式和负离子模式进行梯度洗脱；

S2、对贡柑代谢物组分进行质谱鉴定：以步骤S1的洗脱液为样品，利用质谱仪对目标物质进行定性和相对定量分析，并分别采用正离子和负离子模式进行MS/MS数据依赖性二级扫描；

S3、对步骤S2所得的贡柑代谢物组分分析数据进行预筛选，并将其与标准数据库进行比对，经标准化处理后获得非靶标代谢物的分子结构和相对定量分析数据；

S4、在步骤S3的基础上，利用主成分分析与偏最小二乘法判别分析贡柑非靶标代谢物组分，筛选出贡柑果皮和果肉中的差异代谢物。

3.根据权利要求2所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，低温贮藏的温度为-80℃至4℃，贮藏时间为1至30天。

4.根据权利要求2所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，低温贮藏贡柑果皮或果肉提取代谢物组分的方法为：往经液氮磨碎的贡柑果皮或果肉中加入50％-90％甲醇水溶液，冰上静置后离心收集上清液即可。

5.根据权利要求4所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，贡柑果皮或果肉与甲醇水溶液的料液比为1mg/5-10μL。

6.根据权利要求2所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，步骤S1对贡柑代谢物组分进行色谱分离的具体方法为：利用Hypesil Gold C18色谱柱对样品进行分离，色谱条件为：柱温40℃，流速0.2mL/min，正离子模式流动相的流动相A：0.1％甲酸，流动相B：甲醇，负离子模式流动相的流动相A：5mmol/L醋酸铵，流动相B：甲醇；再采用梯度洗脱模式进行洗脱：0～1.5min：98％A+2％B，1.5～3.0min：98％A+2％B，3.0～10.0min：15％A+85％B，10.0～10.1min：100％B，10.1～11.0min：98％A+2％B，11.0～12.0min：98％A+2％B。

7.根据权利要求2所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，步骤S2对贡柑代谢物组分进行质谱鉴定的具体方法为：利用Q ExactiveTMHF质谱仪对目标物质进行定性和相对定量分析，质谱条件为：选择m/z为100～1500进行离子扫描，喷雾电压为3.5kV，鞘气流速为35psi，辅助气流速为10L/min，离子传输管温度为320℃，辅助气加热器温度为350℃，然后分别采用正离子和负离子模式进行MS/MS数据依赖性二级扫描。

8.根据权利要求2所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，步骤S3具体为：对步骤S2所得的贡柑代谢物组分分析数据依据UPLC-MS分析参数进行预筛选，并将代谢物分子离子峰和碎片离子的预测分子式与mzCloud、mzVault和Masslist数据库进行比对，用空白样本去除背景离子，并对原始定量结果进行标准化处理，最终获得代谢物的分子鉴定和相对定量分析数据。

9.根据权利要求2所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法，其特征在于，步骤S4具体为：在步骤S3的基础上，利用主成分分析与偏最小二乘法，绘制总差异代谢物火山图和聚类热图，比较分析不同低温贮藏贡柑果皮和果肉的共有差异代谢物。

10.权利要求1-9任一项所述的一种低温贮藏下贡柑的非靶标代谢组学方法在贡柑低温保鲜质量控制中的应用。