[发明专利]一种NK细胞冻存液及冻存方法在审
| 申请号: | 202211407542.1 | 申请日: | 2022-11-10 |
| 公开(公告)号: | CN115644169A | 公开(公告)日: | 2023-01-31 |
| 发明(设计)人: | 陈爱华;张玲洁 | 申请(专利权)人: | 四川香雪细胞生物技术有限公司 |
| 主分类号: | A01N1/02 | 分类号: | A01N1/02 |
| 代理公司: | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人: | 余璟仪 |
| 地址: | 610036 四川省成都市成都金牛高新*** | 国省代码: | 四川;51 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 nk 细胞 冻存液 方法 | ||
1.一种NK细胞冻存液,其特征在于,由冻存液A和冻存液B组成;所述冻存液A包括以下组分:人血清白蛋白、右旋糖酐和海藻糖;所述冻存液B包括以下组分:忍冬提取物、551-H3培养基、培养上清浓缩液、羟乙基淀粉和甘油。
2.根据权利要求1所述的NK细胞冻存液,其特征在于,所述冻存液A包括以下体积百分比的组分:人血清白蛋白30~60%、右旋糖酐10~30%和海藻糖25~45%;所述冻存液B包括以下体积百分比的组分:忍冬提取物5~10%、551-H3培养基45~50%、培养上清浓缩液4~6%、羟乙基淀粉18~20%%和甘油21~25%。
3.根据权利要求1所述的NK细胞冻存液,其特征在于,所述冻存液A和冻存液B的体积比为1:1。
4.根据权利要求1所述的NK细胞冻存液,其特征在于,所述培养上清浓缩液的制备方法为:将单个核细胞培养12~14天,离心、过滤、收集上清液,并经过浓缩得所述培养上清浓缩液。
5.根据权利要求3所述的NK细胞冻存液,其特征在于,所述浓缩倍数为6~8倍。
6.一种NK细胞的冻存方法,其特征在于,采用权利要求1~5任一项所述NK细胞冻存液对NK细胞进行冻存。
7.根据权利要求6所述NK细胞的冻存方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)配制冻存液A并置于4℃预冷,配制冻存液B置于-20℃预冷15min;
(2)将冻存液A加入细胞沉淀中,混匀,再滴加冻存液B,混匀得细胞悬液,计算细胞密度;
(3)将细胞悬液分装于冻存管中并进行程序降温。
8.根据权利要求7所述NK细胞的冻存方法,其特征在于,所述步骤(3)中的细胞密度为1*108/ml。
9.权利要求1~5任一项所述NK细胞冻存液在冷冻保存NK细胞中的应用。
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