[发明专利]一种用于同时检测SDZ、SDM和SMP的核酸适配体及其试剂盒使用方法

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体是一种用于同时检测SDZ、SDM和SMP的核酸适配体及其试剂盒使用方法。一种用于同时检测SDZ、SDM和SMP的核酸适配体，核酸适配体的序列为剪切后的SAs16‑1和剪切前的SAs16，核酸适配体由单链DNA组成，且5’末端标记FAM荧光基团。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体是一种用于同时检测SDZ、SDM和SMP的核酸适配体及其试剂盒使用方法。

背景技术

磺胺类抗生素因其抗感染效率高、成本低，在畜牧业中经常用于预防和治疗牲畜的细菌感染，并被列为全球用量最多的十大兽用抗生素之一。然而，已有研究证明，高水平的磺胺类家族抗生素的残留物可以通过食物链在人体中积累，导致过敏反应、肝功能受损、泌尿系统受损和溶解性贫血症状。因此，美国、欧盟和中国对食用组织中磺胺类的最大残留限制为100μg/kg。目前对磺胺类抗生素的检测方法大多都基于酶联免疫分析法、高效液相色谱法(HPLC)和毛细管电泳法、化学荧光法。虽然这些方法具有可靠和敏感等优点，但它们通常需要操作人员具有深厚的专业知识，而且设备昂贵和耗时。因此，有必要开发一种简单、快速、低成本的检测方法来检测食用组织中磺胺类抗生素的残留。

近年来，在检测领域出现了一种新型的核酸探针：核酸适配体(简称：适配体)。适配体又被称为“化学抗体”，相比于传统的抗体有着诸多的优势，比如：化学性质稳定，易修饰，筛选时间短，不需要经过动物实验等。适配体通过指数富集的配体系统进化(SELEX)得到，具有高亲和力和高特异性，能够与目标分子特异性结合，已被用于检测多种物质，如：金属离子、抗生素、毒素、细胞、病毒、蛋白质等。适配体已经广泛应用于生物医药行业以及食品环境检测等领域。目前已经证实适配体在特定的缓冲液体系下可以折叠成独特的空间结构，这种结构可以通过范德华力、氢键和疏水作用与目标分子特异性紧密结合。

目前已报道的适配体都只能识别单一靶标。在磺胺类抗生素家族，还未有一条适配体能够识别多个靶标的报道。

发明内容

本发明为克服上述情况不足，旨在提供一种能解决上述问题的技术方案。

一种用于同时检测SDZ、SDM和SMP的核酸适配体，核酸适配体的序列为剪切后的SAs16-1和剪切前的SAs16，核酸适配体由单链DNA组成，且5’末端标记FAM荧光基团。

进一步的，所述核酸适配体通过以下方法制备：

S11：通过基于氧化石墨烯的系统指数富集的配体系统进化技术GO-SELEX串联-并联法筛选得到SAs16的适配体序列；

S12：通过对适配体序列进行一级结构、二级结构、三级结构进行分析得到SAs16-1序列；

S13：通过荧光分析法测定、分子对接、分子动力学模拟得到核酸适配体的核心识别区域。

一种基于以上所述一种用于同时检测SDZ、SDM和SMP的核酸适配体的试剂盒使用方法，包括以下步骤：

S21：设置含核酸适配体的试剂盒；

S22：获取样品并对其进行预处理；

S23：将处理好的样品放入试剂盒中摇匀30min；

S24：向试剂盒中加入Fe₃O₄/Au/g-C₃N₄，继续摇匀10min；

S25：磁分离后吸取上层清液并测荧光值。

进一步的，步骤S21中试剂盒包括以下组分：荧光标记的核酸适配体、磷酸盐缓冲液。

进一步的，步骤S22中样品为牛奶、蜂蜜中至少一种。

与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：