[发明专利]一种诱导平头炭疽菌产生分生孢子的方法

说明书

本发明公开了一种诱导平头炭疽菌产生分生孢子的方法，具体步骤为：在25‑28℃下，将平头炭疽菌在加入60‑90ppm硫酸链霉素的改良PDA培养基上培养6d后，用涂布棒将菌丝捣断，再继续培养3d。本发明通过改良的分段式培养，平头炭疽菌产孢培养时间由传统的12d缩短到了9d，减少1/3的培养时间，孢子产量由1.0×10⁶cfu/254m²提高到1.0×10⁸cfu/254m²，提高了100倍。

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，尤其涉及一种诱导平头炭疽菌产生分生孢子的方法及其应用。

背景技术

菜用大豆又称为毛豆，因营养丰富、味道鲜美而深受广大消费者的喜爱，正逐渐成为具有较高经济价值的蔬菜之一，给城郊农户带来较大的经济效益，也是我国南方部分省市春季主要栽培的出品创汇的农产品之一，产品大量用于保鲜和速冻加工。然而在菜用大豆种植过程中尤其在结荚至收获上市期间，由平头炭疽菌侵染引起的炭疽病在豆荚上发生严重(汪涛等，2006年；陈吴健，2007年；李海云等，2017年)，感病品种一般田块发病株率为50％左右，豆荚发病率为30％左右，重病田块发病株率达90％以上，豆荚发病率达50％以上，极大地影响了豆荚的商品性及其经济价值，是菜用大豆生产上的一种重要病害，并且其发生危害有日益加重的趋势。研究及生产实践表明，培育和利用抗病品种是目前防治大豆炭疽病最经济有效的方法。而接种炭疽菌开展人工接种的抗病性鉴定评价，是选育和利用抗病品种的不可缺少的手段，育种者可根据抗性鉴定结果，选用抗性材料，缩短抗性品种育种年限，从而有针对性地筛选抗病品种，达到育出的品种具有抗病、增产的目的。

近年来关于大豆炭疽菌的分类鉴定、致病性及致病机制等研究逐渐引起关注，而诱导产孢一直是抗性评价、病原菌的分类鉴定研究中的关键环节，如何快速简易地获得大量孢子决定着抗病性鉴定评价的准确性和研究的进展及成败。目前诱导真菌产孢的主要有扫刷营养体(郭春秋等(2003年)、近紫外光照射(王静等，2005年)、在培养基内加入(NH₄)₂SO₄、酵母等物质(张阳，2013年，黄军凯等2014年)、温光诱导(郭春秋等，2003年)等四种方法，对于不同的菌种，适宜的诱导产孢方法不同。包括平头炭疽菌在内的炭疽菌在实验室内用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养不但产孢慢，产孢很少且不稳定，甚至可能不会产孢，例如陈婷婷(2019年)将芒果胶孢炭疽菌菌株在PDA平板上培养6d后，再取菌块接种于马铃薯葡萄糖(PDB)培养基震荡养15小时，用菌铲交替搅拌后再培养2天才会有少量分生孢子产生；冷伟锋等(2006年)和姚晟伟等(2011)分别用PDA培养基活化苹果轮纹病菌和葡萄溃疡病病菌，纯化后于25℃培养4-5d将菌丝接种到苹果或葡萄枝条在黑光灯下培养10-15d，可得到3-5×10⁶个孢子/254m²；檀根甲等(2018年，CN 108998404.A)将胶孢炭疽菌活化后于26℃-30℃温度下黑暗培养5d，再将菌丝块接种于加入了酵母粉的PDA培养基上于50℃高温下培养3h，在27℃恒温培养7d可诱导胶孢炭疽菌产孢；赵胜等(2016年)大豆平头炭疽菌在PDA培养基上黑暗培养，要12d才能产孢；石妞妞等(2022年)将平头炭疽菌在PDA培养基28℃下培养5d后，转接在PDB液体培养基中黑暗振荡培养7d孢子量可达1×10⁶个孢子/254m²；前期研究结果表明，无论用哪种诱导方式，均是周期长、过程复杂且产孢量低，远不能满足病原菌的毒力测定、杀菌剂的生物活性测定以及品种的抗病性鉴定等研究需求。

为此，能够提供一种快速、产孢量高的诱导平头炭疽菌产生分生孢子的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种诱导平头炭疽菌产生分生孢子的方法，通过本发明方法诱导处理后，可以有效地缩短炭疽菌的培养时间，提高平头炭疽菌产孢量，从而提高工作效率；本发明方法具有操作简便、易于掌握、无需特殊设备设施，成本低、能满足大量试验需求。