[发明专利]真核表达脱氧雪腐镰刀菌烯醇全长抗体的制备方法以及用途

说明书

本发明公开了真核表达脱氧雪腐镰刀菌烯醇全长抗体的制备方法以及用途，属于分子生物学技术领域。本发明提供了一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇的全长抗体，重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的全长抗体的的线性范围(IC20‑IC80)为0.036‑0.654μg/mL，IC50为0.140μg/mL，并且具有良好的特异性不会与其他食品中的常见毒素发生交叉反应。

技术领域

本发明涉及真核表达脱氧雪腐镰刀菌烯醇全长抗体的制备方法以及用途，属于分子生物学技术领域。

背景技术

脱氧雪腐镰刀菌烯醇作为一类重要的谷物污染物，被人畜食用之后，后引起慢性、亚急性、急性中毒，对于人的肠道功能、皮肤、免疫和生殖系统造成危害。其热稳定性质较强，普通的加热没有办法对其造成破坏，国内对于谷物制品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限量标准在1000μg/kg。相对化学检测法(波层色谱法)、仪器分析法(高效液相色谱法)，免疫检测手段因其检测时间短、操作简单、检测成本低的优势成为主流的检测手段。在免疫检测中，抗原抗体特异性免疫反应是检测的核心反应，抗体是最为重要的识别元件。脱氧雪腐镰刀菌烯醇的质量决定了免疫检测的质量，因而必要筛选到高质量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体应用到后期的免疫检测中。

目前市面上应用到免疫检测中的抗体，主要是单克隆抗体，其相对多克隆抗体，其稳定性更高、批次之间差异小，特异性更高。同时，单克隆抗体的制备过程更为繁复，从抗原的合成、动物免疫、细胞融合筛选等步骤，制备周期长，成本高。为克服目前抗体制备的限制，通过将抗体的基因构建到相应的表达载体上，然后导入到适合宿主内进行诱导表达，经过纯化后可获得目的抗体。目前该技术已经广泛应用报道多种真菌毒素的单链抗体、单域抗体等融合抗体的生产中。通过基因工程表达抗体是获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体的一种高效的手段。

目前针对基因工程抗体表达主要是基于大肠杆菌表达体系中，其具有表达产量高，表达速度快的特点，但是由于大肠杆菌属于原核生物，而抗体属于具有高级结构的蛋白质，原核生物很难对其进行正确地折叠修饰，这使得抗体的质量大大下降，具有较低的亲和性和特异性，从而限制了表达抗体的后期应用。

目前，利用表达平台生产抗体热点主要集中于分子量较小的单链抗体，单链抗体保留了抗体对于抗原的识别域，分子量小容易表达，并具有良好的识别能力。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测抗体。

在一种实施方式中，所述脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

在一种实施方式中，所述脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测抗体还具有重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区包含CH1和Fc段，所述Fc段包含CH2和CH3，其中CH1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，Fc段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述轻链恒定区的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明的第二个目的是提供含有编码上述脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测抗体的基因的重组载体。

在一种实施方式中，以PTT5为表达载体。

本发明的第三个目的是提供含有编码上述脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测抗体的基因或上述重组载体的细胞。

在一种实施方式中，所述细胞为哺乳动物细胞系。

在一种实施方式中，所述细胞为Expi293F细胞。

本发明的第四个目的是提供一种检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇的试剂盒。

在一种实施方式中，所述试剂盒中含有上述脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测抗体或重组载体或细胞。