[发明专利]一种链酶亲和素磁微粒封闭剂

说明书

本发明公开了一种链酶亲和素磁微粒封闭剂，属于封闭剂领域。所述封闭剂中包括1‑20g/L的生物素化的BSA、0.1‑2.0mg/L的生物素化的鼠IgG、防腐剂和缓冲剂。通过加入生物素化的BSA和生物素化的鼠IgG两种大小的蛋白，解决了链酶亲和素表面的非特异性吸附，使得反应有高信号强度，同时背景信号值较低，提高了信噪比。

技术领域

本发明涉及封闭剂领域，具体涉及一种链酶亲和素磁微粒封闭剂。

背景技术

链霉亲和素-生物素系统具有极强的非共价作用力，使其广泛应用于生物领域。链酶亲和素磁微粒将链霉亲和素共价连接于固相载体表面，可高效结合蛋白等配体分子。链酶亲和素磁微粒采用超顺磁性微球，有利于快速地捕获目标分子以及实现磁性分离。

为了链酶亲和素磁微粒有更高的特异性和更高的偶联效率，封闭是一个必不可少的过程。

封闭是继包被之后用高浓度的无关大分子溶液再包被的过程。封闭液中的大分子物质可以与固相载体表面上的空白位置结合，以机械填补和吸附覆盖的方式结合在固相载体表面，减少了固相载体表面的蛋白结合位点，避免样本中的背侧蛋白非特异性结合到固相载体表面，出现假阳性的现象。封闭剂应封闭所有的未结合位点而不影响表面上的靶蛋白，同时也不结合靶蛋白表位、不与抗体或检测蛋白有交叉反应。

同样的，在偶联有链霉亲和素的磁微粒包被之后进行封闭，需要在已经交联好的蛋白的基础上，封闭掉链酶亲和素上非特异性吸附表面，对偶联抗体有更好的支撑，更稳定的结合和更高的结合效率。

目前，常用的封闭剂有BSA、脱脂奶粉和酪蛋白。

BSA是最常用的封闭剂，适用于大多数情况。是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，分子量为66KDa，等电点为4.7。但是大部分BSA中有少量的抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生高背景，杂带较多或使得本底水平增高。

中国专利CN201911364741.7公开了一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法，所述封闭液包括如下按重量份计组分：100mL的1×TBS(Tris盐酸缓冲液)、20-60g的牛血清白蛋白(BSA)和14000U/mL-28000U/mL的糖苷酶。该应用于免疫组织化学的封闭液能够将蛋白质的N-连接糖基被切去，暴露抗原决定簇，增强了在免疫组织化学检测中的显色信号。但其稳定性较低，不能确保偶联过程中链酶亲和素磁微粒的稳定性。

脱脂奶粉的成分相对复杂，适用范围较窄。因其自身含有生物素，不能用于生物素标记的抗体系统。脱脂奶粉中含有少量的生物素和吖啶酯残留，在使用生物素-亲和素系统和吖啶酯标记的二抗时，也会使得高背景或本底水平增高，因此在试剂盒的制备中较少应用。

酪蛋白和BSA作用类似，普通酪蛋白不易溶解，操作不方便。

因此，实有必要开发一种链酶亲和素磁微粒的封闭剂，以确保偶联过程中链酶亲和素磁微粒的稳定性，避免磁微粒包被抗原或抗体后在保存过程中产生非特异性吸附、低偶联率而导致试剂的灵敏度降低、信号强度低。

发明内容

本发明的目的是提供一种链酶亲和素磁微粒封闭剂，确保偶联过程中链酶亲和素磁微粒的稳定性，避免磁微粒包被抗原或抗体后在保存过程中产生非特异性吸附、低偶联率，增强了检测的灵敏度、提高了检测的精密度。

为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：

本发明提供了一种链酶亲和素磁微粒封闭剂，所述封闭剂包括生物素化的蛋白、缓冲剂和防腐剂。

具体的，所述链酶亲和素是指与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质。

进一步具体的，所述相似生物学特性是指链酶亲和素和亲和素都是由四个相同亚基组成，均与生物素有极高的亲和力，均可结合四个生物素分子。