[发明专利]糖苷水解酶BvGH18在防治植物螨害中的应用

说明书

本发明属于农业微生物学技术领域，具体涉及糖苷水解酶BvGH18在防治植物螨害中的应用。通过基因工程手段将糖苷水解酶BvGH18的基因构建到冷休克载体pColdII上，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，获得重组蛋白BvGH18，通过蛋白序列比对分析，糖苷水解酶BvGH18属于GH18糖苷水解酶家族。实验证明BvGH18蛋白具有一定的几丁质酶活性：0.299 U/mg，对二斑叶螨24 h半致死浓度为4.826µg/mL，对朱砂叶螨24 h半致死浓度为8.483µg/mL，对柑橘全爪螨24 h半致死浓度为17.421µg/mL。本发明为植物螨害的生物防治提供了新的选择性。

技术领域

本发明属于农业微生物学技术领域，具体涉及糖苷水解酶BvGH18在防治植物螨害中的应用。

背景技术

叶螨属(Tetranychus)隶属于蛛形纲，蜱螨亚纲，真螨目，叶螨科(Tetranychidae)。作为植食性螨类，叶螨的很多种类严重影响着粮食作物、经济作物和观赏植物，其中包括著名的二斑叶螨(Tetranychus urticae)、朱砂叶螨(Tetranychuscinnabarinus)、柑橘全爪螨(Panonychus citri)，严重危害我国果蔬、棉花以及茶叶等经济作物的产量和质量。叶螨体型微小，常在叶片的背面取食叶片，不易被察觉，在作物受害的初期由于未表现出明显的为害症状，因而其危害容易被忽视。加上叶螨繁殖速度快、适应性强、寄主广及易产生抗药性等特点，一旦爆发极易成灾。

目前，针对叶螨的防控与治理多采用传统的化学防治方法，随着化学杀螨剂的滥用，叶螨抗药性剧增，致使螨害愈加严重，不利于农业环境的绿色、可持续发展。目前市面上的杀螨剂大多数为难溶于水的化学物质或是抗生素，相较之下，小分子物质如蛋白类的报道较少。因此，利用新手段开发绿色、高效的叶螨生防制剂是本领域技术人员亟待解决的问题，具有非常重要的实践意义。

发明内容

本发明的目的是提供糖苷水解酶BvGH18或含有糖苷水解酶BvGH18的发酵产物在防治植物螨害中的应用，所述的糖苷水解酶BvGH18为SEQ ID NO.2所示。

本发明的另一个目的是提供了糖苷水解酶BvGH18在制备叶螨杀螨剂中的应用。

本发明为了实现上述目的，采用以下技术方案：

糖苷水解酶BvGH18或含有糖苷水解酶BvGH18的发酵产物在防治植物螨害中的应用，所述的糖苷水解酶BvGH18为SEQ ID NO.2所示，或是加了的其余基因表达元件的SEQ IDNO.2蛋白，所述的元件包括：增强子，纯化标签等；

纯化标签包括：亲和纯化标签，荧光标签，硫氧还蛋白等融合蛋白标签。

所述的应用过程包括，以糖苷水解酶BvGH18为有效成分之一或者唯一有效成分用于植物螨害的杀灭，杀灭方式为触杀；

糖苷水解酶BvGH18或含有糖苷水解酶BvGH18的发酵产物在制备杀叶螨的制剂中的应用，包括以SEQ ID NO.2所示蛋白为有效成分之一，或者唯一有效成分，制备成的叶螨杀灭剂。

以上所述的应用中，优选的，所述的叶螨为二斑叶螨或朱砂叶螨、柑橘全爪螨。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明首次报道了18家族糖苷水解酶具备杀螨活性，为新型杀螨剂的制备提供了新的酶源。

包含糖苷水解酶BvGH18的杀螨剂具有高效、低毒、对环境友好的特点，在生物防治叶螨方面具有良好的应用前景。

附图说明

图1为糖苷水解酶BvGH18纯化后的SDS-PAGE电泳分析图。

图2为糖苷水解酶BvGH18对二斑叶螨的作用效果图。

图3为糖苷水解酶BvGH18几丁质酶活性测定。