[发明专利]一种提取纯化及快速检测苹果皮中特异性多酚含量的方法

说明书

本发明公开了一种提取纯化及快速检测苹果皮中特异性多酚含量的方法，主要步骤为：1)苹果皮样品前处理；2)苹果皮多酚提取；3)检测苹果皮提取液中总多酚含量；4)吸附剂活化；5)多酚吸附纯化过程；6)多酚解析纯化过程；7)检测苹果皮纯化液中总多酚含量；8)苹果皮多酚纯化液稀释；9)利用荧光光谱检测苹果皮多酚纯化液中特异性多酚含量。本发明采用超声强化苹果皮多酚提取，融合静态大孔树脂吸附解析高效纯化苹果皮多酚，并结合多酚物质的自荧光特性提出了利用荧光光谱快速准确定量检测特异性多酚含量的一种方法，满足更快速、操作更简单且成本更低的有效定量检测样品中多种特异性多酚的需求。

技术领域

本发明涉及多酚提取纯化检测技术领域，尤其涉及一种提取纯化及快速检测苹果皮中特异性多酚含量的方法，为一种高效的提取纯化及快速定量检测多酚的方法。

背景技术

苹果中含有大量的多酚类物质，这些多酚化合物位于细胞的质体/液泡中，与苹果的物理特性有关，因此不同品种的苹果之间的差异有关。而且苹果果皮中总多酚化合物的含量远高于果肉，尤其是原花青素、黄酮醇和二氢查尔酮。大量功效研究显示苹果多酚成分具有很好的抗氧化、抗肿瘤、预防心脑血管疾病、保肝和增强记忆等作用，因此高效的提取纯化苹果多酚，特别是选择合适的提取纯化方法选择性的高效增值化苹果皮多酚具有重要意义。

食品中多酚含量的测定方法多种多样，主要包括几种分光光度法和一些涉及分离的有用的仪器技术。在这些方法中，Folin-Ciocalteu方法被因其芳芳简单被广泛用于测定总酚，但只能给出总酚含量的估计，并不能对其中的单一多酚类物质进行定量检测。这是因为任何可氧化的酚羟基都会发生显色反应，而Folin-Ciocalteu就是利用此显色反应表征总多酚含量的。目前高效液相色谱与吸光度、质谱或荧光法检测相结合，特别是高效液相色谱法是量化单个酚类物质最常用的方法之一。但由于灵敏度低，在检测复杂样品时存在局限性且操作过程相对繁琐复杂和成本高。与其他光谱技术相比，荧光光谱具有更高的灵敏度和选择性，它显著降低了光谱复杂性，抑制了光散射干扰。由于其独特的优势，荧光光谱技术在研究存在干扰的复杂食物样品中的微量成分时特别有用。通常情况下，荧光强度的测量是同时扫描发射和激发波长的函数。近十年来，荧光光谱技术已成为食品中营养物质检测分析的热点方法。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺点与不足，本发明的目的在于提供一种提取纯化及快速检测苹果皮中特异性多酚含量的方法。融合超声强化多酚提取，大孔树脂吸附解析纯化多酚及利用多酚物质的自荧光特性，采用荧光光谱选择性快速定量检测苹果皮中特异性多酚含量，克服传统的检测方法只能进行总多酚含量检测或者检测繁琐昂贵等缺点，可满足样品中多种特异性多酚快速定量检测的需求。

本发明公开的一种提取纯化及快速检测苹果皮中特异性多酚含量的方法，其特征在于包括步骤如下：

1)苹果皮样品前处理：苹果皮切割成相同大小，烘箱烘干后，粉碎为粉末；

2)苹果皮多酚提取：将步骤1)获取的苹果皮粉末添加至50％乙醇水溶液中，首先超声辅助30min强化提取，后在恒温水浴搅拌条件下提取2.5小时提取苹果皮中的多酚类物质；

3)检测苹果皮提取液中总多酚含量：利用Folin-Ciocalteu方法检测步骤2)获得的苹果皮提取液中的总多酚含量；

4)吸附剂活化：将大孔树脂吸附剂依次浸泡在乙醇水溶液、盐酸水溶液和氢氧化钠水溶液中6小时进行醇活化、酸活化和碱活化，再次利用蒸馏水不停的冲洗直至洗出液澄清，最终将冲洗干净的活化好的吸附剂放在烘箱中烘干；

5)多酚吸附纯化过程：取步骤3)获得的大孔树脂吸附剂添加到步骤2)获得的苹果皮多酚提取液中，在恒温水浴搅拌条件下吸附4小时，将苹果皮提取液中的多酚物质充分吸附在大孔树脂表面；

6)多酚解析纯化过程：将步骤4)处理后饱和的大孔树脂加入到乙醇水溶液中浸泡3小时，将大孔树脂表面的多酚全部洗脱到解析液中；