[发明专利]一种促进天麻种子萌发的真菌YLW10及其应用

说明书

本发明是一种促进天麻种子萌发的菌株YLW10及其应用，该菌株的分类命名为Mycena abramsii，保藏登记号为：CGMCC No.40281，将YLW10菌株制成天麻种子萌发菌菌包可用于天麻种植。由于YLW10菌株是从昭通野生环境下捕获的原球茎样本中分离得到，保证了野生昭通天麻的品质特性且能够确保适应昭通当地。在与昭通当地种植所用菌株黄缘小菇的对比实验验证了本发明YLW10菌株的高萌发率的优良品质，能有效增加天麻的产量，提高经济效益，可推进萌发菌菌种资源开发，并扩展昭通地区天麻种子萌发菌种资源库，实现昭通天麻的科学规范化、规模化种植。

技术领域

本发明涉及一种促进天麻种子萌发的真菌YLW10及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

天麻(Gastrodia elata)是一种高度特化的兰科植物，无绿叶，不产生叶绿素，终身不进行光合作用，完全依赖真菌营养。天麻的每个蒴果虽然能产生几万粒种子，但种子如粉尘般微小，无胚乳和其他营养贮备部位，必须依靠真菌侵染胚细胞后提供营养才能萌发。目前，天麻一般认为与小菇属(Mycena sp.) 的真菌共生萌发，发育为原球茎后的营养生长需要转换到与另一个特异的真菌蜜环菌(Armillaria mellea)共生完成整个生活史。

天麻萌发菌分离较为不易，较有效的分离来源为原球茎，收集林下树叶用成熟天麻种子诱捕其上的萌发菌，待种子萌发后，用得到的原球茎分离真菌。自1980年分离得到天麻种子萌发菌并应用于天麻有性繁殖以来，萌发菌的分离鉴定一直是研究热点，但由于其为弱腐生菌，其生长慢、难培养的特点使分离鉴定困难较大，分离鉴定得到的菌株不多。用于生产的萌发菌主要是石斛小菇 (Mycena dendrobii)和紫萁小菇(Mycena osmundicola)2种，但在长期的无性繁殖过程中，菌种退化现象十分严重，萌发菌种质资源严重缺乏。并且不同地域分离得到的萌发菌对天麻种子的萌发率和萌发质量也各不相同。因此，迫切需要分离筛选出适合昭通当地的一种优质萌发菌，以保证昭通天麻的产量和质量。

发明内容

本发明提供一种促进天麻种子萌发的真菌YLW10，以及它的分离筛选方法和应用。

本发明所述的真菌为沟纹小菇(Mycena abramsii)YLW10，保藏登记号为： CGMCCNo.40281；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地点：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2022年08月15日。

本发明萌发菌是在野生环境下利用天麻种子袋人工捕获的原球茎中分离到的。

本发明所述真菌的应用为促进天麻种子萌发。即在与天麻种子拌播的萌发中，该菌株萌发率极高，有效地保证昭通天麻的产量和质量。

本发明所述真菌的获取方法包括以下步骤：

1)野外人工捕获原球茎：选择天麻种子自然成熟的7月，在昭通天麻主要产区彝良县小草坝选取有野生天麻分布，没有人工种植的原生地。就地取当地的枯枝落叶和土壤拌天麻种子并装进大小为45cm(长)×30cm(宽)的网格种子袋。3个月后收回种子袋，筛分出种子袋中的天麻组织样品，种子袋中的天麻组织皆为原球茎阶段。表面消毒后放入4℃冰箱保存。

2)天麻种子萌发菌分离培养：先用0.5％的次氯酸钠浸泡30s，再用75％的乙醇浸泡30s，后用无菌水冲洗3次，然后用无菌滤纸沾干。接着用无菌解剖刀切成大概0.02mm的小块，再用无菌的镊子将小块按三点法分别接种在提前设计好的不同种的分菌培养基上，置于28℃恒温培养箱。长出的白色菌落按三点法接于PDA培养基上，直到板上长出纯菌。

3)分子鉴定：将长出纯菌落的真菌进行ITS序列的分子鉴定。采用CTAB 方法提取真菌菌丝的全基因组DNA，然后对DNA的ITS区域进行PCR扩增。 PCR扩增产物送至上海生工生物技术有限公司测序，测序结果在NCBI上进行 BLAST比对分析，记录真菌的分类地位。结合BLAST比对分析结果，该菌株为沟纹小菇(Mycena abramsii)。