[发明专利]一种两级SynNotch逻辑调控结构及其应用

说明书

本发明公开了一种两级SynNotch逻辑调控结构及其应用；该两级SynNotch逻辑调控结构包括靶点结合区域、Notch core区和启动调控蛋白区，且该两级SynNotch逻辑调控结构分为一级SynNotch逻辑调控结构和二级SynNotch逻辑调控结构，而二级SynNotch逻辑调控结构的表达受到一级SynNotch逻辑调控结构的调控。该发明两级SynNotch可以使免疫细胞形成浸润效果，解决了传统CAR结构的常时激活导致的免疫细胞提前耗竭问题、免疫细胞的增殖浸润问题、免疫细胞的过度杀伤及可能发生严重副反应的问题和肿瘤微环境的改善问题，极大的提高了对于肿瘤的杀伤能力及免疫细胞治疗的安全性。

技术领域

本发明涉及细胞基因改造技术领域，尤其涉及一种两级SynNotch逻辑调控结构及其应用。

背景技术

肿瘤（tumour）是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物（neogrowth），因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物（neoplasm）。其中，恶性肿瘤因易发生转移，治疗后易复发且在某些特殊的微环境下导致极难治愈。

IL-7是由骨髓基质细胞分泌的糖蛋白，分子量为25KD；其基因位于第8号染色体。现多采用基因工程手段，从转染含IL-7CDna表达性质粒的哺乳类细胞培养上清中获取IL-7。IL-7的靶细胞主要为淋巴细胞，对来自人或小鼠骨髓的B祖细胞、胸腺细胞及外周成熟的T细胞等均有促生长活性。其功能有：①与干细胞生长因子（SCF）协同能够刺激b前体发生有丝分裂，这一效应可被TGF所抑制；但对B祖细胞（pro-B）的生长没有明显作用。②促进双阴性胸腺细胞的成熟，提供胚胎胸腺细胞发育过程中TCR基因重组的始动信号；但对成熟T细胞无明显作用。③诱导胸腺细胞或外周血淋巴细胞产生LAK细胞活性，其效应细胞主要为CD8+亚群；但IL-7诱导的LAK细胞不具有NK活性。④IL-7能刺激髓样前体细胞和巨核细胞产生集落形成单位和血小板，使机体从环磷酰胺的免疫抑制作用中恢复过来；在较高浓度时，IL-7还能增强巨噬细胞的细胞毒活性，诱导单核细胞分泌细胞因子。

CCL-19 属于 CC 类趋化因子，又称 EB 病毒诱导分子( EBV-induced molecule1 ligand chemokine，ELC)或人巨噬细胞炎性蛋白 3β (macrophage inflammatoryprotein-7eta，MIP-3β)，编码基因定位于9号染色体短臂上，主要在次级淋巴组织和器官如脾和淋巴结的T细胞中表达，趋化幼稚T细胞和成熟DC细胞。有研究发现，CCL-19在抗肿瘤中起诱导T细胞、DC细胞和NK细胞作用，这类免疫细胞浸润到肿瘤组织中各自发挥免疫功能，如细胞毒性、抗原提呈、吞噬和分泌细胞因子来抑制肿瘤生长。在特定的环境下，免疫细胞识别并攻击肿瘤细胞，从而发挥抗肿瘤作用。近年来也有研究发现，CCL-19 可直接与CCR-7受体结合激活受体后通路抑制肿瘤增殖、迁移及侵袭。

幽门螺杆菌（Hp）中性粒细胞激活蛋白（Neutrophil activating protein，NAP）是Hp感染所致胃炎的重要致病因子之一，它促进了炎性细胞中性粒细胞、单核细胞在胃黏膜的聚集，并释放大量的炎症因子，同时诱导氧化活性产物的产生，导致胃黏膜损伤。然而，NAP具有多种生物活性，它可作为配体，激活 Toll样受体（Toll Like receptor，TLR2）促使以分泌IFN-γ为主的Th1免疫应答并抑制Th2免疫反应，为支气管哮喘、过敏等Th2免疫为主的疾病提供了新的治疗手段。同时有学者发现NAP通过激活细胞毒Th1免疫应答抑制了小鼠膀胱癌、肝癌的生长。