[发明专利]诱导成纤维细胞呈现免疫抑制表型的方法

说明书

本发明属于生物医药领域，涉及一种诱导成纤维细胞呈现免疫抑制表型的方法。具体地，本发明涉及一种诱导成纤维细胞呈现免疫抑制表型的方法，包括如下步骤：将成纤维细胞用(1)IFN‑γ或者(2)IFN‑γ和雷帕霉素进行处理。本发明还涉及细胞膜囊泡纳米颗粒和用途。本发明的细胞膜囊泡或者细胞膜包裹的纳米颗粒能够有效地治疗或预防关节炎特别是类风湿关节炎，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种诱导成纤维细胞呈现免疫抑制表型的方法。本发明还涉及细胞膜囊泡纳米颗粒和用途。具体地，所述细胞膜囊泡为滑膜成纤维细胞的细胞膜囊泡。

背景技术

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的自身炎症性疾病，以多个关节持续滑膜炎为特征，最终导致骨破坏⁽¹⁾。据报道，成年人RA的发病率约为0.5-1.0％，是导致劳动力下降、致残的主要疾病之一⁽²⁾。RA发病机制复杂，尚无根治的手段。炎症持续是RA发病的核心，因此控制炎症是RA治疗的基石。尽管近年来随着对RA研究的深入，多种新的靶向药物，包括生物制剂DMARDs(bDMARDs)如TNF-α、IL-6抑制剂以及靶向合成DMARDs(tsDMARDs)如JAK抑制剂等的出现极大地改善了RA的治疗效果⁽³⁾。但即使经过现有药物的足量足疗程治疗，仍有超过10％的RA患者仍有持续进展的炎症，最终导致关节破坏、严重影响患者生活质量⁽⁴⁾。同时，现有药物长期使用造成的泛免疫抑制，也给患者带来了感染、肿瘤等风险。因此，探索新的更安全有效的炎症控制靶点对改善RA患者的预后具有重要意义⁽⁵⁾。

滑膜成纤维细胞(Fibroblast-like synoviocytes，FLS)是RA炎症滑膜中的主要细胞。近年来的研究揭示，FLS为RA炎症持续的重要因素⁽⁶⁾。RA-FLS促进关节中T细胞异常活化，呈现“促炎表型”，表现为：高表达IL-6(促进Th17分化，参与RA发病的重要炎症因子⁽⁷⁾)，是RA炎症关节内IL-6的主要来源⁽⁸⁾；促进T细胞的存活⁽⁹⁾等作用。但在肿瘤和生理炎症中，成纤维细胞还呈现抑制活化T细胞的“免疫抑制表型，表现为：高表达PD-L1、FASL、IDO等，参与炎症缓解、外周免疫耐受维持及肿瘤免疫逃逸^(10,11)。既往研究显示，炎症因子对成纤维细胞表型有调控作用⁽¹²⁾。

细胞膜包裹的纳米颗粒(cell membrane coated nanoparticle)是近年来纳米医学领域新兴的技术，为复杂性疾病提供了全新的高靶向性治疗策略^(13,14)。通过细胞膜的包裹，将膜表面多种已知及未知的分子完整地转移到纳米颗粒表面，模拟源细胞的特征，对多个靶点进行调节。其包裹的细胞膜可与源细胞同源融合，实现药物靶向输送⁽¹⁵⁾。在RA中，已有研究利用活化的巨噬细胞、血小板、内皮细胞的细胞膜制成囊泡，包裹纳米颗粒，在动物模型中评价其治疗应用潜能^(16-18)。

目前，尚需要开发新的治疗RA的手段。

发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，制得了一种诱导成纤维细胞呈现免疫抑制表型的方法，并得到的了经处理的滑膜成纤维细胞。本发明人利用经处理的滑膜成纤维细胞提取得到了细胞膜囊泡，并进一步制得了细胞膜包裹的纳米颗粒。本发明人惊奇地发现，所述细胞膜囊泡或者细胞膜包裹的纳米颗粒能够有效地治疗或预防关节炎特别是类风湿关节炎，具有良好的应用前景。由此提供了下述发明：

本发明的一个方面涉及一种诱导成纤维细胞呈现免疫抑制表型的方法，包括如下步骤：

将成纤维细胞用(1)IFN-γ或者(2)IFN-γ和雷帕霉素进行处理。