[发明专利]一种基于控制比氧消耗速率提高色氨酸生产水平的方法

权利要求书

1.一种基于控制比氧消耗速率提高色氨酸生产水平的方法，其特征在于，所述方法是在利用大肠杆菌发酵生产色氨酸的过程中，当单位菌体干重单位时间消耗的氧的量降至5.0mmol/h/g时，通过补加复合氮料控制单位菌体干重单位时间消耗的氧的量为2.5-4.0mmol/h/g。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合氮料的组成为氨基酸粉0.2g/L，玉米浆干粉0.3g/L，酵母粉0.2g/L、硫酸铵0.03g/L，消泡剂0.01g/L，余量为水，pH8.0。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵过程中采用搅拌联动，控制溶氧不低于20％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵过程中，当发酵2-4h后发酵液中葡萄糖浓度低于1.0g/L时开始补加浓度为650g/L的葡萄糖溶液，使发酵过程中发酵液葡萄糖浓度维持在0.01-0.2g/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当单位菌体干重单位时间消耗的氧的量将至5.0mmol/h/g时，通过补加复合氮料分阶段控制单位菌体干重单位时间消耗的氧的量。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述分阶段控制是指在发酵8-20h时，控制单位菌体干重单位时间消耗的氧的量为3.5-4.0mmol/h/g；在发酵20-32h时，控制单位菌体干重单位时间消耗的氧的量为3.0-3.5mmol/h/g；在发酵32h至发酵结束时，控制单位菌体干重单位时间消耗的氧的量为2.5-3.0mmol/h/g。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵前还包括对大肠杆菌进行斜面培养、一级种子培养和二级种子培养；

斜面培养基的组成为蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，磷酸二氢钾1g/L，七水硫酸镁0.5g/L，琼脂粉15g/L和四环素0.05g/L，余量为水；

种子培养基的组成为葡萄糖10g/L，酵母粉4g/L，柠檬酸0.5g/L，硫酸铵1g/L，磷酸二氢钾1g/L，VB11 mg/L，生物素0.35mg/L，七水硫酸镁1.5g/L，七水硫酸亚铁2.8mg/L，微量元素混合溶液2mL/L，余量为水；

发酵选用的培养基组成为葡萄糖30g/L、酵母粉10g/L、柠檬酸2.5g/L，硫酸铵4g/L，磷酸二氢钾5g/L，七水硫酸镁2.8g/L，七水硫酸亚铁90mg/L，VB15 mg/L，生物素2mg/L，微量元素混合溶液4mL/L。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述一级种子培养是将斜面培养后的菌体接种于种子培养基中，于37℃，220rpm，摇瓶培养10-12h。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述二级种子培养是将一级种子液按照1％的接种量接种于种子培养基中，于36-37℃，通气比0.5VVM，200rpm，罐压0.03-0.05MPa，pH7.0-7.2，溶氧≥30％的条件下培养10-12h。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述发酵是将二级种子液按照10％的接种量接种于发酵培养基中，于36-37℃，通气比1.0VVM，溶氧≥20％，罐压0.03-0.05MPa，pH6.8-7.0的条件下培养36-40h。