[发明专利]一种抑制ACSL4表达的小干扰RNA及其应用

说明书

本发明涉及医药技术领域及神经退行性疾病技术领域，涉及一种抑制ACSL4表达的小干扰RNA及其应用，小干扰RNA的核苷酸序列为：正义链:5’‑GAUGGAUGCUUACAGAUUAtt‑3’；反义链:5’‑UAAUCUGUAAGCAUCCAUCtt‑3’。本发明首次通过设计并合成小干扰RNA来抑制ACSL4表达，显著抑制小胶质细胞介导的神经炎症，并减轻MPTP诱导的帕金森病中多巴胺神经元的死亡率，改善帕金森疾病的运动神经功能。本发明为小干扰RNA的临床应用提供了重要的理论基础，也为治疗帕金森病的药物研发提供了新思路。

技术领域：

本发明涉及医药技术领域及神经退行性疾病技术领域，涉及一种抑制ACSL4表达的小干扰RNA及其应用，利用这个小干扰RNA治疗帕金森疾病。

背景技术：

帕金森病(Parkinson′s disease)是一种常见的中老年神经系统退行性疾病，主要以黑质多巴胺能神经元进行性退变和路易小体形成的病理变化，纹状体区多巴胺递质降低、多巴胺与乙酰胆碱递质失平衡的生化改变，震颤、肌强直、动作迟缓、姿势平衡障碍的运动症状和睡眠障碍、嗅觉障碍、自主神经功能障碍、认知和精神障碍等非运动症状的临床表现为显著特征。目前被广泛接受的治疗策略是早期使用抗帕金森病药物，但抗帕金森病药物治疗时不能突然停药，特别是使用左旋多巴及大剂量多巴胺受体激动剂时，以免发生撤药恶性综合征。且使用抗帕金森病药物之后易感精神疾病，比如焦虑、失眠、精神错乱等。不少研究认为神经炎症是早期导致产生帕金森疾病的原因，目前针对神经炎症进行帕金森治疗的药物还没有报道。

Long-chain acyl-coenzyme A synthetases(ACSLs)是在脂质代谢中发挥重要作用的一个家族蛋白酶。作为ACSL家族的一员，ACSL4表现出优先使用花生四烯酸(AA)作为底物，并通过结合游离AA来促进含AA磷脂的重塑。目前，许多研究揭示代谢相关的酶在神经炎症起始阶段发挥重要调控作用，而ACSL4在神经炎症及帕金森病中的作用未能得到充分阐述。RNA干扰(RNAi)是有效沉默或抑制目标基因表达的过程，该过程通过双链RNA(dsRNA)使得目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。沉默机制可导致由小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)诱导实现靶mRNA的降解，或者通过小RNA(miRNA)诱导特定mRNA翻译的抑制。目前国内外还未发现关于通过设计抑制ACSL4表达的siRNA来抑制神经炎症，进而抑制帕金森金病的发病程度的研究报道。

发明内容：

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺陷，提供一种抑制ACSL4表达的小干扰RNA(siACSL4)及其应用，siACSL4能抑制小胶质细胞介导的神经炎症，进而抑制帕金森病发病进程。

为了实现上述目的，本发明提供一种抑制ACSL4表达的小干扰RNA，(siACSL4)，所述siACSL4的核苷酸序列如下所示：

正义链:5’-GAUGGAUGCUUACAGAUUAtt-3’(SEQ ID NO.1)；

反义链:5’-UAAUCUGUAAGCAUCCAUCtt-3’(SEQ ID NO.2)。

为了在体内实验对ACSL4的敲减，本发明针对ACSL4的siRNA设计了shRNA，序列为：上链：GATCCGAGGCTTCCTATCTGATTACTCGAGTAATCAGATAGGAAGCCTCTTTTTTG；下链:AATTCAAAAAAGAGGCTTCCTATCTGATTACTCGAGTAATCAGATAGGAAGCCTCG。

本发明还提供所述抑制ACSL4表达的siACSL4及shACSL4在制备治疗帕金森病药物中的应用。

本发明与现有技术相比，有益效果如下：