[发明专利]调控桃中桦木醇合成的PpCYP716A1基因及应用

说明书

本发明公开了调控桃中桦木醇合成的PpCYP716A1基因及应用，所述PpCYP716A1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述PpCYP716A1基因编码的氨基酸序列如SEQ IDNO.2。本发明以帚形山桃杂交Fsubgt;2/subgt;群体中桦木醇含量不同的两个单株(R32，高桦木醇含量；S27，低桦木醇含量)为材料进行转录组测序，首次发现PpCYP716A1基因对于桦木醇合成的影响。同时本发明通过在桃果肉中瞬时过表达PpCYP716A1基因进行了验证，结果证明瞬时过表达PpCYP716A1基因的桃果肉中桦木醇含量增加。本发明为培育高含量桦木醇的桃品种奠定了基础。

技术领域

本发明涉及调控桃中桦木醇合成的PpCYP716A1基因及应用，属于农业生物技术领域。

背景技术

桦木醇(Betulin)是一种普遍存在于植物中的羽扇豆烷型三萜类物质，具有广泛的生物活性。从20世纪70年代开始，许多研究报道了桦木醇的药理作用，包括抗癌作用、抗炎活动、抗血脂作用、抗血脂作用、心血管作用、抗糖尿病作用、抗抑郁作用、抗病毒作用和抗菌作用。另外桦木醇在农业害虫控制方面也发挥着重要作用，例如对害虫产生抗食作用，并且干扰害虫的生长发育。在桃中，桦木醇被认为是防御蚜虫的主要代谢物，解析其合成机制具有重要意义。但迄今为止尚未见到有关从桃中到克隆到调控桦木醇合成的基因。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一个首次从桃中获得的PpCYP716A1基因，该基因具有调控桦木醇合成的功能。

为了实现上述目的，本发明的技术方案之一是提供：

调控桃中桦木醇合成的PpCYP716A1基因，所述PpCYP716A1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述PpCYP716A1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2。

本发明的技术方案之一是提供：一种含有PpCYP716A1基因的过表达载体。

所述过表达载体的启动子为CaMV 35S。

所述过表达载体的骨架载体为pRI101-AN载体。

本发明的技术方案之一是提供：一种构建上述过表达载体的方法，包括以下步骤：

步骤S1：以桃叶片的cDNA为模板，采用如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物，PCR扩增得到目的片段；

步骤S2：将所述目的片段插入线性化的pRI101-AN载体；

步骤S3：将插入目的片段的pRI101-AN载体转化至大肠杆菌，并进行抽提，得到所述过表达载体。

本发明的技术方案之一是提供：PpCYP716A1基因在调控桃中桦木醇合成中的应用。

PpCYP716A1基因可提高桃中桦木醇含量。具体方法为：所述PpCYP716A1基因与载体pRI101-AN正向连接后得到pRI101-PpCYP716A1重组表达载体，将所述pRI101-PpCYP716A1重组表达载体转化到DH5α大肠杆菌中，筛选阳性菌提取质粒，将测序验证过表达载体中的PpCYP716A1基因序列正确的质粒转化农杆菌菌株GV3101，将配制好的农杆菌侵染液注射到桃果肉中，黑暗培养24h后，16h光照/8h黑暗培养3-4天。

本发明的有益效果：

本发明以帚形山桃杂交F₂群体中桦木醇含量不同的两个单株(R32、S27)为材料进行转录组测序，首次发现PpCYP716A1基因对于桦木醇合成的影响。同时本发明通过在桃果肉中瞬时过表达PpCYP716A1基因进行了验证，结果证明瞬时过表达PpCYP716A1基因的桃果肉中桦木醇含量增加。本发明为培育高含量桦木醇的桃品种奠定了基础。

附图说明