[发明专利]一种同时区分过氧阴离子和半胱氨酸的双功能荧光探针的合成与应用

权利要求书

1.一种同时区分过氧阴离子和半胱氨酸的双功能荧光探针，其特征在于，所述的双功能荧光探针的化学结构式如下所示：

。

2.如权利要求1所述的双功能荧光探针的合成，其特征在于，所述双功能荧光探针的合成方法包括以下步骤：

步骤1. 合成4-(7-羟基-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

a. 将适量7-羟基-2-氧代-2H-色烯-3-羧酸加入适量无水二氯甲烷中，再加入适量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)，常温搅拌反应30 min，

b. 将适量的哌嗪-1-羧酸叔丁酯缓慢加入上述溶液，然后再加入适量1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺，常温反应24 h，旋干，柱层析纯化得到4-(7-羟基-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯；

步骤2. 合成4-(7-((二苯基磷酰基)氧基)-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

将适量4-(7-羟基-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和三乙胺加入适量的无水二氯甲烷中，然后在氮气保护条件下，缓慢加入适量二苯基次膦酰氯，常温搅拌1h，反应完毕后，旋干，柱层析得到4-(7-((二苯基磷酰基)氧基)-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯；

步骤3. 合成4-(7-((二苯基磷酰基)氧基)-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-鎓 2,2,2-三氟乙酸盐

将4-(7-((二苯基磷酰基)氧基)-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯加入适量二氯甲烷中，然后缓慢加入适量三氟乙酸，常温过夜，直接旋干，加入适量95%乙醇重结晶，过滤，旋干得4-(7-((二苯基磷酰基)氧基)-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-鎓 2,2,2-三氟乙酸盐；

步骤4. 合成双功能荧光探针

将4-(7-((二苯基磷酰基)氧基)-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-鎓 2,2,2-三氟乙酸盐加入适量二氯甲烷中，然后缓慢加入适量三乙胺，常温搅拌5 min后加入适量7-氯苯并[c][1,2,5]恶二唑-4-磺酰氯，常温搅拌2 h，反应完全后，旋干，通过95%乙醇重结晶，过滤，旋干得到所述的双功能探针。

3.如权利要求2所述的双功能探针的合成方法，其特征在于，所述步骤的4-(7-((二苯基磷酰基)氧基)-2-氧代-2H-色烯-3-羰基)哌嗪-1-鎓 2,2,2-三氟乙酸盐和7-氯苯并[c][1,2,5]恶二唑-4-磺酰氯摩尔比为1:1。

4.如权利要求1所述的双功能荧光探针的应用，其特征在于，所述的双功能荧光探针能够在环境中定量分析过氧阴离子和半胱氨酸，在活细胞中同时区分成像过氧阴离子和半胱氨酸的器件的应用。