[发明专利]一种尿液中游离醛固酮的检测方法

权利要求书

1.一种尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

(1)将尿液样本、硫酸锌甲醇溶液和磷酸水溶液混合后，离心，收集上清液；将上清液加入含阴离子交换填料的固相萃取多孔板中，使用磷酸水溶液、含氨水的甲醇水溶液和纯水进行淋洗，再使用甲醇水溶液进行洗脱，得到纯化后的尿液样本；

(2)通过超高效液相串联质谱仪对步骤(1)处理后的尿液样本进行检测，得到游离醛固酮的含量；

其中，所述检测中流动相A为体积百分含量为0.05-0.2％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈。

2.根据权利要求1所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述硫酸锌甲醇溶液的浓度为0.05-0.2mol/L；所述尿液样本和硫酸锌甲醇溶液的体积比为(1-3):1。

3.根据权利要求1或2所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述离心前还包括涡旋，所述涡旋的时间为1-5min；

优选地，步骤(1)中，所述离心的转速为7000-15000rpm，所述离心的时间为3-10min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，所述阴离子交换填料包括季铵基和/或叔胺基化学键合的聚苯乙烯/二乙烯基苯；

优选地，步骤(1)中，所述含阴离子交换填料的固相萃取多孔板包括Oasis MAX SPE板。

5.根据权利要求1-4任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述淋洗具体包括以下步骤：依次使用0.01-0.1vol％的磷酸水溶液、含0.05-0.2wt％氨水的5-15vol％甲醇水溶液和纯水进行淋洗；

优选地，步骤(1)中，所述磷酸水溶液、含氨水的甲醇水溶液和纯水的体积比为(1-2):(1-2):(1-2)。

6.根据权利要求1-5任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，所述洗脱具体包括以下步骤：使用体积百分含量为60-80％的甲醇水溶液进行洗脱至纯水中；

优选地，所述甲醇水溶液和纯水的体积比为(1-1.5):1。

7.根据权利要求1-6任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序如下所示：

在0-0.2min内，流动相A的体积占比恒定为75-85％，流动相B的体积占比恒定为25-15％；后匀速变化至第1.7min，流动相A的体积占比为45-55％，流动相B的体积占比为55-45％；后匀速变化至第2.0min，在第2.0-2.5min内，流动相A的体积占比恒定为5-15％，流动相B的体积占比恒定为95-85％；后匀速变化至第3.0min，流动相A的体积占比为75-85％，流动相B的体积占比为25-15％；

优选地，所述梯度洗脱的流速为0.3-0.5mL/min，所述梯度洗脱的进样体积为5-15μL。

8.根据权利要求1-7任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测采用的色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C8，色谱柱的长度为50-100mm，内径为1.5-2.5mm，填充物粒径为1-2μm；

优选地，步骤(2)中，所述检测的柱温为40-50℃；

优选地，步骤(2)中，所述检测采用的内标物为醛固酮的C13标记物或氘代标记物，所述醛固酮的氘代标记物为d4-醛固酮和/或d7-醛固酮。

9.根据权利要求1-8任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测的线性范围为10-10000pg/mL，所述线性回归系数在0.999以上。

10.根据权利要求1-9任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测中采用电喷雾电离ESI源；

优选地，步骤(2)中，所述检测中毛细管电压为2-4kV，锥孔电压为20-50V；

优选地，步骤(2)中，所述检测中脱溶剂气流速为800-1200L/Hr，进样锥气体流速为130-170L/Hr，喷雾气压力为5-9bar。