[发明专利]一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用

说明书

本发明提供了一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用，属于植物细胞工程技术领域。本发明将体细胞胚子叶切成长×宽为2～4mm×2～4mm的胚块，先将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，再将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种。本发明发现限定胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基培养出现的胚性愈伤组织的胚块数量具有显著性提高，限定胚块近轴面贴体胚分化培养基分化形成次生体胚的胚块数量和次生体胚数量具有显著性提高，使用本发明所述方法可实现橡胶树次生体胚高效发生，为橡胶树组培苗工厂化生产以及遗传转化体系提供了新的途径。

技术领域

本发明属于植物细胞工程技术领域，尤其涉及一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用。

背景技术

橡胶树(学名：Hevea brasiliensis(Willd.exA.Juss.)Muell.Arg.)是大戟科、橡胶树属植物。橡胶树是一个比较典型的热带雨林树种，是热带雨林上层的多年生热带高大乔木，经济寿命高达30～40年，所分泌的胶乳是重要的工业原料，世界上使用的天然橡胶，绝大部分由橡胶树生产。并且橡胶树的木材质轻，花纹美观，加工性能好，经化学处理后可制作高级家具、纤维板、胶合板、纸浆等，在国民经济中占有举足轻重的地位。

目前，橡胶树自根无性系的生产能力，还只能提供小规模的实验应用，规模化生产受到了橡胶树低效的胚胎发生、低效的植株再生和低效的自根无性系微繁三个方面的限制。在橡胶树次生体胚发生接种过程中，现有技术通常将橡胶树体细胞胚子叶切成2～4mm见方的胚块，然后随机将其近轴面或远轴面贴培养基接种至愈伤组织诱导培养基，经过一段时间培养、诱导出现胚性愈伤组织后，再将其按原来的贴培养基面接种至体胚分化培养基，分化形成次生体胚。然而该方法存在次生体胚发生效率低、次生体胚发生效率不稳定的问题，无法满足生产上低成本、高效率繁育橡胶树体胚苗的需要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种橡胶树次生体胚高效发生方法，可以显著提高诱导出现胚性愈伤组织的胚块数量、分化形成次生体胚的胚块数量和次生体胚数量。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种橡胶树次生体胚高效发生方法，所述方法包括：体细胞胚子叶切块，将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，再将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种。

优选的，所述胚块长×宽为2～4mm×2～4mm。

优选的，用酒精性马克笔区分胚块近轴面和远轴面。

优选的，所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加2～4mM CaCl₂，6～8μMKT，8～8.2μM NAA，6.5～7μM 2,4-D，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。

优选的，诱导培养条件为：黑暗条件，培养温度为22～25℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。

优选的，所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，调整大量元素至原来的4/5，添加2～2.5μM 6-BA，13～15μM KT，1.2～1.6μM GA₃，0.05～0.15μM NAA，3.5～4μMABA，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。

优选的，分化培养条件为：黑暗条件，培养温度为24～28℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。

本发明还提供了上述方法在橡胶树离体繁殖中的应用。

相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：