[发明专利]MEFLC细胞培养上清的应用

说明书

本发明提供一种MEFLC细胞培养上清的应用。本发明通过对MEFLC培养上清的功能研究，发现MEFLC培养上清对hiPSC‑CM在缺氧(CoCl₂)、活性氧(H₂O₂)、抗肿瘤药物(阿霉素)处理下具有保护作用。而MEFLC培养上清中含量较高而HCFC中没有的蛋白，这些蛋白可能与MEFLC上清液对hiPSC‑CM在缺氧、活性氧、抗肿瘤药物处理下的保护作用有关。

技术领域

本发明涉及细胞培养产物技术领域，特别涉及MEFLC细胞培养上清的应用。

背景技术

目前，iPSc技术在心血管疾病方面的研究和应用体现在两个方面，一是将心血管病病人的体细胞编程为iPSc后在体外建立疾病模型，可以在细胞水平研究发病机制及有效药物，二是将iPSc或iPSc分化的心肌细胞移植到病人体内，来治疗心肌梗死、心力衰竭等疾病。

已有体内实验证实未分化的iPSc细胞可以在体内分化成为心肌细胞，但这类细胞由于具有胚胎干细胞特征而具有致瘤风险。因此，在体外诱导iPSc细胞分化为心肌谱系细胞，然后再移植注入心脏可能是规避这一风险更佳的选择。已有研究证实，在MI小鼠心梗区注射iPSc-CM能够明显改善心梗小鼠的心功能，在MI大鼠心梗部位移植iPSc-CM和内皮细胞共培养的细胞薄片也能改善心脏功能，但移植到局部的细胞存活率低一直是细胞移植疗法共同存在的问题，优化体内生存时间是临床转化的关键问题。

转录因子基因MYOG编码肌细胞生成素(Myogenin)蛋白，是生肌调节因子(MRFs)基因家族的成员之一。MRFs转录因子家族(包括Myod、Myf5、Mrf4和MYOG)在骨骼肌发生的每一个阶段都起着关键作用。该家族所有成员共同含有一个保守的螺旋-环-螺旋(bHLH)基序，可以与下游基因的E盒结合，从而激活下游肌肉特异性基因的表达。研究表明，MYOG通过控制、启动成肌细胞的融合和肌纤维的形成，而在肌肉分化过程中起关键作用。在小鼠中的研究显示，MYOG基因缺失会导致严重的肌肉分化缺陷，从而造成围产期死亡。因此，MYOG是骨骼肌发育过程中必需的调控因子，并且是不可替代的。目前，已有研究证实，MYOG基因在小鼠、鸭、草鱼、京海黄鸡等动物的心脏中都有表达，可能与心肌的生长发育相关。但MYOG基因在人心脏组织中的表达及在心脏发育中的作用尚未见报道。

发明人对获得的MEFLC细胞培养上清进行功能性研究，以开发其在疾病中的应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题，就是对MEFLC细胞培养上清进行功能性研究，以进一步开发其在疾病中的应用。

本发明的MEFLC细胞，为人心肌成纤维样细胞，该细胞株于2022年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNO.62409。相关信息可参见于专利申请号为2022109079687的专利申请。

通过对MEFLC培养上清的功能研究，发现MEFLC培养上清对hiPSC-CM在缺氧(CoCl₂)、活性氧(H₂O₂)、抗肿瘤药物(阿霉素)处理下具有保护作用。而MEFLC培养上清中含量较高而HCFC中没有的蛋白，这些蛋白可能与MEFLC上清液对hiPSC-CM在缺氧、活性氧、抗肿瘤药物处理下的保护作用有关。

附图说明

图1为不同培养条件和药物处理下细胞的活力图。

具体实施方式

为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。

1.MEFLC构建

构建步骤：