[发明专利]磺胺类药物印迹仿生抗体-上转换荧光探针制备方法

说明书

本发明涉及一种磺胺类药物印迹仿生抗体‑上转换荧光探针制备方法，该方法将二氧化硅包裹的UCNPs微球为稳定剂，然后以磺胺二甲基嘧啶为主要模板分子，磺胺甲基嘧啶为辅助模板分子，甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，通过Pickering乳液法聚合制备磺胺类药物印迹仿生抗体‑上转换荧光探针UCNPs@SiO₂@MIP。制备的荧光探针以红外光为激发波长，抗基质干扰能力强，可对磺胺类药物实现广谱识别和检测。该制备方法简单，避免了表面活性剂的使用，降低了有机溶剂的用量，经济环保，对食品中磺胺类药物检测具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于化学、材料、生物检测等交叉领域，具体涉及印迹仿生抗体-上转换荧光探针的制备，特别涉及一种磺胺类药物印迹仿生抗体-上转换荧光探针的制备方法。

背景技术

磺胺类药物（Sulfonamides，SAS）又称对位氨基苯磺酰胺，是一组合成化疗药物。SAS广泛用于治疗由几种革兰氏阴性菌（大肠杆菌、痢疾杆菌等）和阳性菌（菌链球菌、葡萄球菌等）引起的不同感染，主要是基于对微生物的影响，通过抑制微生物冷门代谢和干扰核酸和蛋白质的合成来影响细菌繁殖。由于SAS其抗菌谱广、性质稳定、价格低廉，经常被滥用，造成食品污染所以在肉、奶、蛋等动物源性食品中，欧盟制定了SA最大残留限量（MRL）为100μg/kg（EU EMEA/MRL/026/95）。食品法典委员会（CAC）已将牛奶和动物源性肝脏、肾脏、肌肉和脂肪中SA的最大残留限量（MRL）分别设定为25μg/kg和100μg/kg。目前对食品中磺胺类药物残留的检测方法主要为色谱、色谱-质谱联用法等。但这些方法操作复杂、分析周期长、仪器昂贵，严重限制了其应用推广。综上所述，急需研制一种灵敏度高、荧光检测简单、快速的传感器。

上转换纳米粒子（UCNPs）可以通过光子上转换过程从近红外（NIR）之外的长波长激发转换为较短波长的紫外（UV）或可见（Vis）辐射。不同于量子点、有机染料等传统荧光探针，UCNPs结合了非线性光学现象和反斯托克斯发光特性。它具有优异的光谱特性，如长荧光寿命和窄带宽，还具有独特的物理和化学特性，包括低毒性、高的组织穿透深度、可忽略的自发荧光、良好的光稳定性和生物相容性及优越的抗基质干扰能力，适用于构建新型荧光探针用于分析检测。

分子印迹技术（Molecular Imprinting Technology，MIT）是指具有特定三维空腔、与模板分子互补形状、对特定靶分子进行位点特异性识别的识别技术。合成的分子印迹仿生抗体具有选择性高、灵敏度强、稳定性好等优势。传统分子印迹仿生抗体-上转换荧光探针制备主要包括本体聚合方法、凝胶溶胶方法、沉淀聚合方法等。这些方法制备的分子印迹仿生抗体荧光探针有机溶剂用量大，且探针表面的印迹仿生抗体层厚度难以控制。

Pickering乳液是指以微、纳米固体颗粒作为稳定剂的乳液体系，有机溶剂用量少，经济环保。在Pickering乳液体系中构建印迹仿生抗体-上转换荧光探针构建，可大大降低有机溶剂用量，目前，期待制备磺胺类药物印迹仿生抗体-上转换荧光探针，用于目标分子的选择识别与测定。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的缺点：灵敏度低、荧光检测复杂、迟缓的传感器，提供了一种磺胺类药物印迹仿生抗体-上转换荧光探针的制备方法。

技术方案

一种磺胺类药物印迹仿生抗体-上转换荧光探针制备方法，以磺胺二甲基嘧啶SM₂为主要模板分子，磺胺甲基嘧啶SMR为辅助模板分子，以甲基丙烯酸MAA为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯EGDMA为交联剂，包有二氧化硅外壳的上转换纳米微球UCNPs@SiO₂为乳液稳定剂，通过Pickering乳液聚合方法构建磺胺类药物印迹仿生抗体-上转换荧光探针UCNPs@SiO₂@MIP；其具体制备步骤如下：

（1）上转换纳米微球的制备方法：