[发明专利]一种培养溶磷藻类的生物炭液体培养基及其应用方法

说明书

本发明公开了一种培养溶磷藻类的生物炭液体培养基及其应用方法，所述应用方法包括以下步骤：（1）配置培养基：按比例称取原料，并加无菌水混合得到液体培养基，所述培养基中包含生物炭；（2）灭菌：对步骤（1）所得的液体培养基进行高压蒸汽灭菌处理后移至无菌室，冷却到室温后，边搅拌边将培养基分装到培养瓶中；（3）接种：在无菌室内进行接种作业；（4）孵育：将接种后的培养基放入无菌恒温箱内，孵育后即可收获藻液。本发明通过特定培养基的配制，并且依次通过灭菌、接种、孵育和溶磷量检测，可以获得高产量和溶磷功能更强的溶磷藻类。本发明操作简单，成本低、溶磷藻类生长速度快、培养后溶磷效果好，产生良好收益。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种培养溶磷藻类的生物炭液体培养基及其应用方法。

背景技术

磷是植物生长和作物发育所需的主要必需营养素之一，然而，世界上磷的储量有限，正在逐渐耗尽。大多数农业土壤都含有大量无机和有机形式的磷，但植物的有效磷浓度通常非常低。莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）是典型的溶磷藻类。

磷（P）是植物生长所必需的营养素，磷的缺乏可能导致植物产量不足和营养不良。目前富磷肥料已广泛应用于农业，以提高作物的生产率。不幸的是，大部分通过磷肥引入的磷立即与土壤中的矿物质结合或沉淀，使其无法被植物吸收。此外，土壤侵蚀是导致土壤磷流失的另一个关键途径，从而导致地下水污染和受纳水体富营养化。土壤微生物在养分转化中起着积极作用，其中溶磷藻类在磷循环中起着关键作用。通过分泌有机酸和/或磷酸酶等，促进不溶性磷源（磷矿物质和有机磷）溶解为可溶性磷。生物炭的施用可以极大地减少化肥的使用，并通过刺激微生物活性、酶的生产和活性促进可持续农业的发展。

但是现有技术中，并没有任何的利用生物炭培养溶磷藻类的方法。

发明内容

本发明提供一种培养溶磷藻类的松木生物炭液体培养基的制备方法及应用，旨在增加溶磷藻类的产量及其溶磷能力。

本发明是这样实现的，所述培养溶磷藻类的生物炭液体培养基的应用方法，包括以下步骤：

（1）配置培养基：按比例称取原料，并加无菌水混合得到液体培养基，所述培养基中包含生物炭；

（2）灭菌：对步骤（1）所得的液体培养基进行高压蒸汽灭菌处理后移至无菌室，冷却到室温后，边搅拌边将培养基分装到培养瓶中，每一个培养瓶中培养基的质量为30g~40g；

（3）接种：在无菌室内进行接种作业，每个培养瓶中取1ml纯菌液进行接种；

（4）孵育：将接种后的培养基放入无菌恒温振荡气候箱内，保持温度25℃，振荡速度为100rpm，光照强度为1000～2000 lx，光暗比12 h:12 h，孵育96h后即可收获藻液。

进一步的，所述应用方法还包括步骤（5）溶磷量测试：根据《农业行业标准NY/T1847-2010（中华人民共和国农业部，2010）》方法，采用钼锑抗比色法测定培养基中可溶性磷含量。

进一步的，所述生物炭的炭化温度为500℃。

进一步的，步骤（1）所述生物炭为松木生物炭，所述松木生物炭液体培养基包含以下质量浓度（mg/L）的组分：20~60松木生物炭、磷酸盐溶液8~9、TAP盐溶液10、醋酸盐溶液10、微量元素溶液1、无菌水1000。

进一步的，所述松木生物炭液体培养基包含以下质量浓度（mg/L）的组分：200松木生物炭、磷酸盐溶液9、TAP盐溶液10、醋酸盐溶液10、微量元素溶液1、无菌水1000。

进一步的，所述松木生物炭液体培养基包含以下质量浓度（mg/L）的组分：400松木生物炭、磷酸盐溶液8.5、TAP盐溶液10、醋酸盐溶液10、微量元素溶液1、无菌水1000。