[发明专利]一种玉米耐高温基因ZmCTU2的应用

权利要求书

1.一种玉米耐高温基因ZmCTU2的应用，其特征在于，所述玉米耐高温基因ZmCTU2用于获得耐高温玉米植株，所述玉米耐高温基因ZmCTU2的全长编码区的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的一种玉米耐高温基因ZmCTU2的应用，其特征在于，所述玉米耐高温基因ZmCTU2用于获得耐高温玉米植株的方法为：

S1、用BamHI/SpeI双酶切pTF101.1-3×Flag载体，在温度为7℃的条件下反应6h后，将酶切产物用1％琼脂糖凝胶分离后，切下11.54Kb大小的条带，用DNA凝胶回收试剂盒回收产物，得到BamHI/SpeI双酶切pTF101.1-3×Flag载体的回收产物；

S2、以玉米自交系B73的cDNA文库为模板，以特异性引物F和特异性引物R为引物，2×KOD Mix为缓冲液进行PCR反应，克隆所述玉米耐高温基因ZmCTU2的全长编码区，PCR扩增后，用1％琼脂糖凝胶分离，切下约1380bp大小的条带，用DNA凝胶回收试剂盒回收PCR产物，得到玉米耐高温基因ZmCTU2的全长编码区PCR回收产物；

PCR反应体系为2×KOD Mix 10μL，特异性引物F1μL、特异性引物R1μL、玉米自交系B73的cDNA文库1μL，灭菌超纯水补至20μL；所述PCR扩增的反应条件为：98℃预变性10min；98℃变性10s，55℃退火10s，68℃延伸40s，扩增40个循环；68℃延伸10min；所述特异性引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述特异性引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；

S3、利用同源重组方法将S2中得到的玉米耐高温基因ZmCTU2的全长编码区PCR回收产物中的玉米耐高温基因ZmCTU2的全长编码区连接至S1中得到的BamHI/SpeI双酶切pTF101.1-3×Flag载体的回收产物中pTF101.1-3×Flag载体的BamHI/SpeI位点之间，所用启动子为玉米多聚泛素基因启动子，在温度为50℃的条件下进行连接反应25min，得到连接产物；将所述连接产物转化到大肠杆菌中，扩增繁殖，利用质粒提取试剂盒提取后，得到连接成功且序列正确的载体，该载体命名为pTF101.1-ZmCTU2；

S4、将S3中得到的pTF101.1-ZmCTU2载体导入农杆菌EHA105后，得到重组农杆菌侵染玉米自交系B104的幼胚，将侵染后的幼胚诱导愈伤组织，再在含有草甘膦除草剂的培养基上分化出植株，得到的植株为ZmCTU2过表达转基因植株，即为耐高温玉米植株。

3.根据权利要求2所述的一种玉米耐高温基因ZmCTU2的应用，其特征在于，S1中酶切体系为：BamHI 1μL，SpeI 1μL，Cutsmart buffer 5μL，pTF101.1-3×Flag载体10μL，灭菌超纯水补至50μL。

4.根据权利要求2所述的一种玉米耐高温基因ZmCTU2的应用，其特征在于，S3中同源重组体系为：2×Hieff Clone Enzyme Premix 5μL，BamHI/SpeI双酶切pTF101.1-3×Flag载体的回收产物2μL，玉米耐高温基因ZmCTU2的全长编码区PCR回收产物1μL，灭菌超纯水补至10μL。