[发明专利]一种检测抗Ri抗体的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测抗Ri抗体的试剂盒及其应用。该试剂盒中包含检测抗Ri抗体的试剂盒用的细胞爬片组件，所述细胞爬片组件包含NOVA1和NOVA2抗原的转染细胞，覆盖抗原表位更加完整、全面；试剂盒采用基于转染细胞的检测方法(CBA)以识别靶抗原的三维结构表位；更加适用于采用目前主流抗体检测技术平台的临床检验实验室，特异性强、灵敏度高，具有很高的应用价值。

技术领域

本发明属于基因工程和抗体检测技术领域，具体涉及一种检测抗Ri抗体的试剂盒及其应用。

背景技术

副肿瘤神经综合症是一种严重的致残性的神经系统免疫病，该病对免疫治疗有效，但其早期诊断非常关键，及时的确诊和治疗有助于改善患者神经功能，延长患者生命。目前该病的诊断主要依据副肿瘤神经综合症相关的抗神经抗体，抗体阳性可作为确诊依据。副肿瘤性小脑性共济失调是副肿瘤神经综合症中较常见的一种，抗小脑浦肯野细胞抗体检测阳性是诊断副肿瘤性小脑性共济失调的主要依据。抗Ri抗体是副肿瘤性小脑性共济失调的诊断性抗体之一，而NOVA1与NOVA2两种蛋白是抗Ri抗体针对的抗原。目前临床应用的抗Ri抗体的检测试剂主要是商品化的免疫印迹法试剂盒，抗原为NOVA1，未包括NOVA2，抗原覆盖不全面；另外，免疫印迹法只能检测针对抗原线性表位的抗体，在检测准确性，包括特异性和敏感性方面存在不足。

目前，在国内、外的临床神经免疫实验室，抗体检测的主流方法和检测实验平台正在逐步升级为以转染细胞为底物的间接免疫荧光方法(IIF)，即以基于细胞的检测(CBA)，CBA可以表达具有三维结构的抗原表位，对抗体检测具有更高的准确性。然而，目前市售试剂没有基于CBA法的同时覆盖NOVA1与NOVA2两种抗原的试剂，急需研发对应的技术与产品。

现有技术的缺点：(1)抗原为NOVA1，未包括NOVA2，抗原覆盖不全面；(2)免疫印迹法只能检测针对线性表位的抗体，不能检测识别抗原的构象或者三维结构表位；(3)不适合目前主流的基于细胞的检测(CBA)的检测实验平台。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于CBA法的同时覆盖NOVA1与NOVA2两种抗原的检测试剂。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一方面，提供一种细胞爬片组件，包含表达NOVA1和NOVA2的细胞。

在本发明的一些实施方式中，所述NOVA1的核苷酸序列SEQ ID NO.1所示，所述NOVA2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本发明的一些实施方式中，所述NOVA1的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述NOVA2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

在本发明的一些实施方式中，所述细胞爬片组件还包括：固定液、封闭液、通透液、洗涤液。

在本发明的一些实施方式中，所述固定液为多聚甲醛、可使用无水乙醇、丙酮、其他浓度的多聚甲醛溶液或任何商业化的细胞固定液。

在本发明的一些实施方式中，所述通透液为0.1～2％Triton X-100的PBS溶液。

在本发明的一些实施方式中，所述洗涤液为PBS和/或吐温。

在本发明的一些实施方式中，所述封闭液包含0.01～0.5％叠氮钠、0.2～5％胎牛血清、0.1～2％Triton X-100的PBS溶液。

在本发明的一些实施方式中，所述稀释液包含0.01～0.5％叠氮钠、0.2～5％胎牛血清、0.1～5％Triton X-100的PBS溶液。

上述固定液、通透野、洗涤液、封闭液等可以替换为本领域常用的其他试剂，本发明并不对此进行特殊限定。

本发明的第二方面，提供本发明第一方面检测抗Ri抗体的试剂盒用的细胞爬片组件的制备方法，包含以下步骤：