[发明专利]一种重组人碱性成纤维细胞生长因子及其制备方法与应用

说明书

本发明提一种重组人碱性成纤维细胞生长因子及其制备方法与应用。该重组人碱性成纤维细胞生长因子的氨基酸序列如SEQ ID:1所示。本发明提供的重组人碱性成纤维细胞生长因子是通过基因工程制备得到的，与天然人碱性成纤维细胞生长因子相比，本发明提供的重组人碱性成纤维细胞生长因子具有较高的热稳定性，在较高温度下更加不易变性，其生物学效应更持久，在实际应用过程中降解速度更慢，在科研和细胞培养领域具有极其重要的意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种重组人碱性成纤维细胞生长因子及其制备方法与应用。

背景技术

70年代中期，Gospodarowiz从脑垂体和脑组织中分离纯化出一种细胞生长因子，因其能促进成纤维细胞增殖，故命名为成纤维细胞生长因子(fibrobast growth factor，FGF)。按照等电点不同，成纤维细胞生长因子可分为碱性成纤维细胞生长因子(basicfibrobast growth factor，bFGF)和酸性成纤维细胞生长因子(acid fibrobast growthfactor，aFGF)。bFGF的等电点为9.6，aFGF的等电点为5.6，均为不含糖的肽类，有约56％相同氨基酸排列顺序。

与酸性成纤维细胞生长因子相比，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在生物进化上具有很强的保守性，各种动物的bFGF都有很高的同源性。人和牛bFGF的氨基酸序列同源性达到98.7％。bFGF蛋白多肽链氨基酸末端的少许加长或缩短并不影响活性，分子量为17～20KD。bFGF分子结构中有4个半胱氨酸，以此形成分子的三维空间结构。

其次，bFGF作为细胞分裂原，体外作用十分强烈，成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有很强的促细胞分裂增殖活性。此外，bFGF是重要的促有丝分裂因子，也是形态发生和分化的诱导因子。bFGF在体外细胞培养中能在低浓度下发挥作用。

在科研和细胞大规模培养领域，bFGF目前是细胞培养基的重要成分之一。但是，天然的bFGF在组织中含量甚微，从组织中提取则成本过高、产量低，并且具有不稳定性，在细胞培养过程中降解速度快。

发明内容

本发明提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子及其制备方法与应用，该重组人碱性成纤维细胞生长因子是通过基因工程制备得到的，与天然的人碱性成纤维细胞生长因子相比，本发明提供的重组人碱性成纤维细胞生长因子具有较高的热稳定性，在实际应用过程中降解速度更慢，在科研和细胞培养领域具有极其重要的意义。

根据本发明的第一个方面，提供一种重组人碱性成纤维细胞生长因子，该重组人碱性成纤维细胞生长因子的氨基酸序列如SEQ ID:1所示。

本发明提供的重组人碱性成纤维细胞生长因子(重组bFGF)的氨基酸序列与天然的人碱性成纤维细胞生长因子(天然bFGF)的氨基酸序列不同，与天然bFGF相比，本发明提供的重组bFGF具有良好的热稳定性，比天然bFGF更加稳定，在实际应用过程中降解更慢，在科研和细胞培养领域均具有极其重要的意义。

优选地，上述重组人碱性成纤维细胞生长因子由以下步骤制备得到：

(1)合成目的基因；

(2)将目的基因连接到质粒上，构建得到表达载体；

(3)将表达载体导入宿主细胞中；

(4)对宿主细胞进行诱导，表达得到重组人碱性成纤维细胞生长因子。

本方案涉及的重组人碱性成纤维细胞生长因子是通过因工程制备得到的，与从组织中提取天然bFGF相比，通过基因工程获得重组bFGF的成本相对较低，产量高，并且制备得到的重组bFGF的热稳定性高，更加不易发生降解。

根据本发明的第二个方面，提供一种核苷酸序列，该核苷酸序列编码上述重组人碱性成纤维细胞生长因子。