[发明专利]一种保健食品中叶酸含量的检测方法及其应用

说明书

本发明属于食品成分检测技术领域，具体涉及一种保健食品中叶酸含量的检测方法及其应用，所述检测方法为高效液相色谱法，色谱条件包括：采用C₁₈ODS柱，4.6×250mm，流动相为pH＝6.1的含有磷酸二氢钾、四丁基氢氧化铵水溶液、磷酸、水和甲醇混合溶液，洗脱流速为1.0～1.4ml/min，等度洗脱的采集时间为45min，进样量为20μl，柱温为33℃～37℃，检测波长为280nm；本发明的检测方法样品处理简单，易操作，检测结果RSD2％，对含有多种矿物质、维生素的保健品中叶酸成分检测灵敏度高、准确性和耐用性好，能够有效全面的监控含有叶酸的保健食品质量。

技术领域

本发明属于食品成分检测技术领域，具体涉及一种保健品中叶酸的检测方法及其应用。

技术背景

叶酸对人体具有重要的生理功能，缺乏叶酸能引起人体巨幼红细胞性贫血，例如孕妇如 果缺乏叶酸会造成新生儿神经管缺陷或无脑，前期人类对叶酸的生理功能及对人体作用理解 不多，使缺乏叶酸导致患病的人群没法得到营养补充。随着时间和人类对叶酸的作用认识， 许多国家开始在人类的日常饮食中添加叶酸，这就为叶酸的检测提出较高要求。

目前，针对含有叶酸的不同产品以及检测对象不同开发出不同样品中叶酸的检测方法， 而通常用的是微生物法和药典中的高效液相色谱法。由于微生物法检测叶酸检测时间长，且 需要购买菌种，菌种的储存、培养条件要求较严格，相对来说增加了检测成本及时间，因此， 微生物法检测叶酸具有很大局限性，包括场地、设备等的局限，难以获得普遍实用性。高效 液相色谱法相比微生物法检测叶酸含量具有更快速、高效、准确的优势，目前，现有技术中 对与叶酸含量的高效液相色谱检测法中，部分采用酸性流动相体系，如中国专利文献 CN105181829A和CN112834677，均采用酸性洗脱体系，为甲酸水和甲酸乙腈的梯度洗脱， 该洗脱条件主要针对于叶酸及其衍生物或者结构相似性较高的物质分离，但该体系洗脱样品 时叶酸的出峰时间过快，即保留时间低于5min，甚至在2～4min即可出峰，对于食品、保健 品等成分复杂的样品，难以准确测定其中叶酸的含量；李跃中等人开发了一种测定保健食品 中叶酸含量的HPLC法(李跃中,孙丽华,徐水祥,等.HPLC法测定保健食品中叶酸含量及稳 定性研究[J].分析仪器,2019(1):4)其将叶酸标品溶于0.5％氨水中，将样品溶于0.5％氨水中 并在75℃下加热20min，并将样品进行稳定性处理，即在恒温恒湿条件下稳定1～3个月，然 后进行色谱检测，检测的流动相为磷酸盐缓冲液：甲醇＝70：30，柱温为30℃，叶酸的保留 时间为7～8min，获得的精密度RSD＝0.53％，重现性RSD＝2.2％，但该方法采用的样品为稳 定1～3个月后的样品，且样品前处理仅通过氨水溶解，未经过其他处理，对于成分复杂的叶 酸产品难以准确测定，因而该检测方法对于含有不同组分的叶酸产品、不同稳定性的叶酸产 品难以获得相同的检测结果，同时，该方法采用的洗脱体系为磷酸盐缓冲液-甲醇，未对pH 进行考察，而酸碱性对叶酸产品有一定的影响，加标回收率较低，因此，该方法存在单一普 遍性，对于有pH要求的叶酸产品并不适用；专利文献CN110967231A公开了一种叶酸含量 的检测方法，该方法对于样品进样前采用了缓冲溶液与氨水进行处理，可抑制钙、铁等物质 对叶酸含量检测准确性的影响，同时可提高叶酸的稳定性，该专利采用的色谱条件为 pH＝7.0～9.0的磷酸盐缓冲溶液，该方法仅适用于成分较为单一的叶酸产品，对于复杂成分的 样品而言，难以获得准确的叶酸含量；CN107561172A公开了一种同时检测营养素软胶囊中 多种维生素含量的方法，该方法采用高效液相色谱法，其中样品经过超声溶解、过滤后进行 上样，洗脱体系为含有离子试剂和缓冲盐的水溶液与乙腈的混合洗脱液，该检测方法的回收 率为90～105％，精密度、重复性和稳定性的RSD2％，但是该检测方法中的洗脱体系pH＝3， pH太低影响样品洗脱不完全，同时对于设备有腐蚀情况，不利于设备维护保养，设备使用寿 命会变短，增加设备成本；另外，孙天龙也开发了一种叶酸含量的HPLC测定方法(孙(龙天). 多元维生素片中叶酸含量的HPLC测定方法验证[J].海峡药学,2012,24(4):3)，该方法采用 四丁基氢氧化铵溶液和硫氰酸铵、磷酸氢二钠混合液对叶酸样品和叶酸标品均进行处理，采 用pH＝2.5的磷酸氢二钠-乙腈溶液进行洗脱，叶酸的保留时间为3.5～4min，由于出峰位置太 短，与溶剂峰有相连，因此，该检测方法并不准确。