[发明专利]一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法

权利要求书

1.一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于，检测操作步骤如下：

(1)被检测物前处理

(1.1)用料理机将待检测水果制成均质的浆状物，即试样；

(1.2)称取25.00g试样，分别用40mL甲苯提取两次，合并提取液，将提取液旋蒸，用正己烷复溶，制成待净化液；

(1.3)将待净化液过固相萃取柱净化，将洗脱液用氮气吹至近干，再加入0.05mL浓度400μg/mL的十七烷酸甘油三酯内标溶液，最后用二氯甲烷定容至1ml，得到待检测液；

所述固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2组成的复合填料；

(2)定性定量检测

将5μL巴西棕榈蜡标准系列溶液和待检测液分别先后注入气相色谱质谱联用仪，采用相同色谱条件与质谱条件进行测定，获得巴西棕榈蜡标准溶液和待检测液的色谱质谱图谱；

定性分析操作如下：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与待检测液的图谱进行比较，对比两者C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间和相对离子丰度比；当该C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间偏差小于5％，且相对离子丰度比满足最大容许误差时，则说明待检测液中含有巴西棕榈蜡；

定量分析操作如下：使用内标法进行定量，根据添加到相应标准品的内标溶液十七烷酸甘油三酯的浓度与测得的相应的峰面积比值来校正测得的巴西棕榈蜡标准溶液浓度，以校正后的巴西棕榈蜡标准系列溶液的浓度为横坐标，校正后的C56、C58、C60峰面积之和为纵坐标，作线性回归得到标准曲线方程；根据待检测液中添加的内标溶液的浓度和对应峰面积比值来校正测得的C56、C58、C60面积之和，最后，将校正后的待检测液中C56、C58、C60峰面积之和带入标准曲线方程计算，得到待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，根据公式计算得试样中巴西棕榈蜡的含量，公式中X是试样中巴西棕榈蜡含量，单位为mg/kg；C为由标准曲线计算出定容后的待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，单位为μg/mL；M为试样的质量，单位为g；V为待检测液最后定容体积，单位为mL。

2.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(1.2)中，称取25.00g试样，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己烷，充分溶解旋干物，将溶解液转移至50ml离心管，再分别用5mL正己烷洗旋蒸瓶内壁两次，洗液均转移至离心管，作为待净化液。

3.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(1.3)中，用15mL二氯甲烷活化固相萃取柱，将待净化液倾入柱中，先用10mL体积浓度7％的二氯甲烷淋洗小柱，再用10mL正己烷淋洗小柱，弃去流出液；然后以15mL体积浓度20％的二氯甲烷洗脱，并收集洗脱液，于温度50℃条件下水浴氮吹至近干，在吹干物中加入0.05mL十七烷酸甘油三酯内标溶液，再用二氯甲烷定容至1.0mL，得到待检测液。

4.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：所述固相萃取柱为过滤器式，柱管内由上至下依次设有上层筛板、氨丙基硅胶、中层筛板、硅胶和下层筛板；所述氨丙基硅胶的质量为1g，硅胶的质量为2g；所述氨丙基硅胶的厚度和硅胶的厚度相同，均为15-25mm；上层筛板、中层筛板、下层筛板的结构和材料均相同。

5.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述巴西棕榈蜡标准系列溶液为质量体积浓度5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的标准系列溶液，其中代表质量的物质为巴西棕榈蜡，代表体积的物质为溶剂二氯甲烷。

6.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，高温气相色谱质谱联用仪检测条件为：30m×0.25mm×0.1μm的CD-5HT色谱柱；进样口：360℃；进样量：5μL；柱流速：1.0mL/min；脉冲不分流进样：脉冲压力500kPa，脉冲时间0.2min；升温程序：160℃保持3min，以20℃/min升至320℃保持13min，以5℃/min升至350℃保持16min，以5℃/min升至360℃保持34min；传输线：300℃，离子源：300℃；SIM模式，特征成分选择离子质核比如下：C56酯为369、397、425、817，以质核比为369的离子定量；C58酯为369、397、425、845，以质核比为397的离子定量；C60酯为397、425、453、873，以质核比为425的离子定量；十七烷酸甘油三酯为327、381、579。