[发明专利]重组质粒、小RNA随机过表达质粒文库及其建立方法和应用

权利要求书

1.一种重组质粒，其特征在于，包括第一表达单元和第二表达单元；

所述第一表达单元从5’至3’依次包括以下元件：第一启动子和TAS1c基因，所述TAS1c基因中产生成熟tasiRNA的序列替换为ccdB基因，所述ccdB基因5’端和3’端分别设置酶切位点；

所述第二表达单元从5’至3’依次包括以下元件：第二启动子和miRNA173编码序列。

2.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述第一启动子包括Ubi、ACT或35S启动子；

所述第二启动子包括Ubi、ACT或35S启动子。

3.一种小RNA随机过表达质粒文库的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

a.提取植物中的小RNA，添加特异接头，然后反转录得到cDNA，再经过PCR扩增后获得DNA文库；

b.分别酶切权利要求1或2所述的重组质粒和a步骤获得的DNA文库，连接后建立得到ccdB基因替换为小RNA编码序列的小RNA随机过表达质粒文库。

4.根据权利要求3所述的建立方法，其特征在于，所述植物包括玉米、水稻、油菜或烟草；

优选地，a步骤中，提取小RNA的方法还包括采用AGO1抗体进行免疫沉淀的步骤；

优选地，所述小RNA的大小为20-25nt。

5.一种小RNA随机过表达质粒文库，其特征在于，采用权利要求3或4所述的建立方法建立得到。

6.权利要求1或2所述重组质粒或者权利要求5所述的小RNA随机过表达质粒文库在植物内源小RNA功能高通量研究中的应用。

7.一种植物内源小RNA功能高通量研究的方法，其特征在于，包括如下步骤：

c.将权利要求5所述的小RNA随机过表达质粒文库转染植物，获得不同性状的植株；

d.根据植株性状，获得植株中过表达小RNA的功能。

8.miR319a-3p在调控植物分蘖中的应用。

9.一种小RNA，其特征在于，所述小RNA的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

10.权利要求9所述小RNA在调控植物育性或结实率中的应用。