[发明专利]一种抗MIC的人源化单链抗体、免疫吸附剂及其用途

说明书

本发明提供了一种抗MIC的人源化单链抗体、其编码基因、表达载体、宿主、结合物或偶联物、吸附剂剂其用途，本发明提供的人源化单链抗体可以特异性结合人血液或血浆中的NKG2D配体，而解除可溶性MIC蛋白异常升高引起的肿瘤免疫抑制作用。本发明提供的人源化单链抗体，与传统抗体相比，具有分子量小、稳定性强、低免疫原性、成本低、易于表达且表达量高，适合于大规模生产。本发明将人源化单链抗体与固相载体相结合，吸附效率高，吸附性能稳定，对血浆中的其他蛋白非特异性吸附量低，特异性好，在临床治疗上安全性能好、经济效益高。而且，本发明提供的人源化单链抗体降低了吸附配基脱落引起的副作用，提高了安全性。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体是一种抗MIC的人源化单链抗体、免疫吸附剂及其用途。

背景技术

NKG2D是一种同源二聚体II型跨膜C类凝集素受体，其在所有的NK细胞、大部分CD8αβT细胞、NKT细胞和γδT细胞以及少部分具有调节活性的CD4αβT细胞中表达，是肿瘤细胞识别中最重要的激活受体之一(Chitadze et al.2013)。NKG2D受体和配体的相互作用可以激活免疫细胞介导的杀伤作用。NKG2D配体在健康的人体组织里通常不表达或低水平表达，但在被感染细胞和癌细胞的细胞膜表面高水平表达。在人类中，NKG2D配体包括MICA和MICB(I类MHC链相关蛋白A和B)，它们都被MHC的基因编码，基因序列有84％相同(Lietal.1999)。MICA和MICB可从肿瘤细胞表面释放，形成可溶性MICA和MICB(简称sMIC)，sMIC通过下调NKG2D的表达抑制NK细胞和T细胞对肿瘤细胞的识别与杀伤，从而导致肿瘤发生免疫逃逸。MICA和MICB都具有高度多态性，目前已发现MICA的蛋白变异体有192种，在中国，80％以上的人群的基因型为MICA*002、008、009、010、012；MICB的蛋白变异体为42种，在世界各国人群分布的同源性比MICA高，其中MICB*005是频率最高的。

可溶性MIC在肿瘤病人血液中的存在与其对效应细胞的抑制作用，使之成为一个潜在的抗肿瘤靶点。库利南公司在CN112566659A/CN113056484A公开了抗MICA/B抗体靶向MIC蛋白的α3结构域，其可以结合膜结合型的MICA*004以及重组的游离MICA*001、002、004、008、009和MICB，并且能抑制PLC/PRF/5肝癌细胞表面MICA的脱落。Jennifer Wu等以MICB为抗原，开发了抗MIC抗体，该抗体用于可生成可溶性MICB的转基因小鼠构建的肿瘤模型中，能提高肿瘤微环境的免疫活性，降低肿瘤的质量并抑制其转移，同时没有引起明显的系统性毒性。CN110088137A、WO2014140884A2及US20200165343A1等公开了能够结合MICA/B的抗体，主要结合MICA/B蛋白的α3结构域，可有效结合MICA*002、008、009、018和MICB*005，并与免疫细胞的CD16结合，进一步提高毒性，但该抗体不能增强NK细胞对以外泌体形式释放MIC的肿瘤细胞的毒性。CN108779178A公开了一种抗MICA抗体，该抗体结合NKG2D结合表面附近的MICA侧面的α2结构域，可结合MICA*001、004、007、008。单抗药物需要的剂量都比较大，大剂量输入抗体药物也存在一定的安全风险。