[发明专利]抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.抗体鉴定方法，其特征在于，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别目标磷酸化位点，所述抗体鉴定方法包括：将待鉴定的抗体分别与四条鉴定多肽反应，检测结果同时满足(Ⅰ)～(Ⅲ)，则判定待鉴定的抗体是特异性识别目标磷酸化位点的抗体：

(Ⅰ)待鉴定的抗体与第一鉴定多肽和第三鉴定多肽反应为阳性；

(Ⅱ)待鉴定的抗体与第二鉴定多肽反应为阴性；

(Ⅲ)待鉴定的抗体与第四鉴定多肽反应为阴性或弱阳性；

所述四条鉴定多肽分别为：

第一鉴定多肽为基本多肽中只有目标磷酸化位点磷酸化的多肽；

第二鉴定多肽为基本多肽中无任何位点磷酸化的多肽；

第三鉴定多肽为基本多肽中目标磷酸化位点和潜在的磷酸化位点均磷酸化的多肽；

第四鉴定多肽为基本多肽中目标磷酸化位点未磷酸化，同时潜在的磷酸化位点磷酸化的多肽；

所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；

所述潜在的磷酸化位点为：目标磷酸化位点的氮端侧和碳端侧，分别与所述目标磷酸化位点相邻的第一个苏氨酸残基、丝氨酸残基或酪氨酸残基。

2.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第5个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第5个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；

或，所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第6个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第6个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；

或，所述基本多肽由目标磷酸化位点氮端侧相邻的第7个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第7个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽。

3.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，检测结果的值大于等于第一阈值为阳性，大于等于第二阈值且小于第一阈值为弱阳性，小于第二阈值为阴性。

4.根据权利要求3所述的抗体鉴定方法，其特征在于，所述第一阈值为1，所述第二阈值为0.5。

5.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，四条鉴定多肽的工作浓度分别独立的为0.03125～0.0625μg/mL。

6.根据权利要求5所述的抗体鉴定方法，其特征在于，四条鉴定多肽的工作浓度分别独立的为0.03125μg/mL。

7.根据权利要求1所述的抗体鉴定方法，其特征在于，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白目标磷酸化位点；所述目标磷酸化位点为Tau蛋白中的目标磷酸化位点；所述四条鉴定多肽的氨基酸序列来源于Tau蛋白。

8.根据权利要求1-7任一项所述的抗体鉴定方法，其特征在于，所述抗体鉴定方法包括：

(a)使用包被缓冲液分别稀释四条鉴定多肽；所述包被缓冲液为pH为9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液；

(b)将稀释后的四条鉴定多肽分别加入酶标板孵育，洗板后封闭；

(c)使用PBS缓冲液把待测抗体稀释至0.5μg/mL，加入包被好的酶标板中，35～39℃孵育57～63min后洗板；

(d)加入辣根过氧化物酶标记的二抗，37℃孵育1～2h，洗板；

(e)加入显色液室温反应5～10min，加终止液终止，检测OD450nm；当OD≥1时判读为阳性；当0.5≤OD＜1时，判读为弱阳性；当OD＜0.5时，判读为阴性。