[发明专利]一种用于检测循环肿瘤细胞的微流控芯片及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种用于检测鼻咽癌循环肿瘤细胞的微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括从下至上层叠设置的芯片基板和芯片盖板，所述芯片基板上设置有至少一个微流控通道，所述微流控通道上连接有生物素修饰的核酸适配体EPCAM、Vimentin、EGFR和CD44。本发明通过对捕集条件进行多靶标优化，在微流控芯片上连接多个生物素修饰的核酸适配体EPCAM、Vimentin、EGFR和CD44，建立高灵敏度和特异性的多靶标纳微流控芯片，从而实现高灵敏度地捕获和分离富集鼻咽癌循环肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及细胞检测技术领域，特别涉及一种微流控芯片及基于微流控芯片检测循环肿瘤细胞的方法。

背景技术

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)是指由原发灶脱落，侵入血液循环的肿瘤细胞。CTC能逃避机体免疫，在原发或远处脏器驻留，从而形成复发、转移病灶。鼻咽癌循环肿瘤细胞研究主要集中于临床病理回顾性分析。鼻咽癌CTC研究主要基于检测平台，文献报道临床样本CTCs检出率52.6％～92.0％。放疗或术后CTCs明显减少，但部分研究显示疾病分期与CTCs数量可能存在相关性，与CTCs检出率无显著相关性。为了提高CTCs应用价值，与其他标志物如EBV DNA、VCA、MMP-9、COX2等联合诊断和预后评估鼻咽癌研究显示，检测结果众说纷纭。究其原因，临床实践中CTCs检测方法尚未标准化，不同组织来源肿瘤细胞仅70％表达EpCAM等，依赖密度梯度离心、膜过滤法的物理分离和上皮源EpCAM免疫亲和分离计数CTCs。该类方法存在分离效率、纯度低且无法克服CTCs异质性，从而造成假阳性、漏检或CTCs破裂，导致临床应用敏感性、特异性低及诊断预后关联性差，严重影响鼻咽癌诊断治疗的医疗决策。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种微流控芯片及基于微流控芯片检测循环肿瘤细胞的方法，旨在解决现有微流控芯片无法高灵敏度地检测到血液样本中鼻咽癌循环肿瘤细胞的问题。

本发明的技术方案如下：

一种用于检测鼻咽癌循环肿瘤细胞的微流控芯片，其中，所述微流控芯片包括从下至上层叠设置的芯片基板和芯片盖板，所述芯片基板上设置有至少一个微流控通道，所述微流控通道上连接有生物素修饰的核酸适配体EPCAM、Vimentin、EGFR和CD44。

所述用于检测鼻咽癌循环肿瘤细胞的微流控芯片，其中，所述核酸适配体EPCAM的核苷酸序列为SIQ ID No.1，所述核酸适配体Vimentin的核苷酸序列为SIQ ID No.2，所述核酸适配体EGFR的核苷酸序列为SIQ ID No.3，所述核酸适配体CD44的核苷酸序列为SIQID No.4。

所述用于检测鼻咽癌循环肿瘤细胞的微流控芯片，其中，所述微流控通道上设置有六棱柱纳米柱阵列结构。

所述用于检测鼻咽癌循环肿瘤细胞的微流控芯片，其中，所述微流控通道经过链霉亲和素修饰。

所述用于检测鼻咽癌循环肿瘤细胞的微流控芯片，其中，所述芯片基板上设置有5个微流控通道。

一种微流控芯片的制备方法，其中，包括步骤：

提供一种芯片基板，所述芯片基板上设置有至少一个微流控通道；

对所述微流控通道进行刻蚀处理，在所述微流控通道内形成六棱柱纳米柱阵列结构；

在所述微流控通道上连接生物素修饰的核酸适配体EPCAM、Vimentin、EGFR和CD44后，再在所述芯片基板上盖上芯片盖板，制得所述微流控芯片。

一种微流控芯片的应用，其中，将所述微流控芯片用于检测鼻咽癌循环肿瘤细胞。