[发明专利]一种定量检测D-二聚体的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种定量检测D‑二聚体的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法，试剂盒包括试纸条和壳体；试纸条包括PVC底板，在PVC底板的板面上沿其长度方向顺次设有样本垫、过滤膜、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维膜上依次设有第一定量带、第二定量带、质控带；壳体上依次设有加样口、观察窗和条形码；制备方法：将荧光微球活化并与抗体偶联，稀释抗体标记的荧光微球标记物并喷涂于标记垫上，稀释抗体并喷涂制成定量带和质控带，在PVC底板上依次粘贴硝酸纤维素膜、标记垫、过滤膜、样本垫和吸水垫，并组装在壳体中，将其干燥后密封。本发明线性范围广，准确度高，重复性好，临床相关性好；制备方法生产成本低，可用于工业化生产。

技术领域

本发明涉及医学体外诊断技术领域，尤其涉及一种定量检测D-二聚体的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法。

背景技术

D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子ⅩⅢ交联后，经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，能够反映体内的凝血功能和纤溶活性，是机体高凝状态、血栓形成、继发性纤溶亢进的指标。在深静脉血栓、肺栓塞、弥散性血管内凝血、重症肝炎等疾病中水平升高，以及溶栓治疗后均可见D-二聚体水平升高，可作为溶栓治疗的有效观察指标。

1975年，Gaffney等首先提出D-二聚体的检测可作为监测凝血性疾病的有用的工具。目前对D-二聚体的检测实质上是对包含有D-二聚体的纤维蛋白片段的测定。发生凝血时，凝血酶可作用于纤维蛋白，将其转变为交联纤维蛋白，同时纤溶系统被激活，降解交联纤维蛋白形成各种纤维蛋白降解产物(FDP)碎片。在γ链的作用下，可将两个含D片断的纤维蛋白碎片连接起来，形成D-二聚体。人体内D-二聚体水平的升高可预示其体内存在继发性纤溶亢进。

现有技术中，D-二聚体测定试剂盒的灵敏度低，线性范围较窄，低浓度样本检测不出浓度，高浓度样本需要稀释重测，增加了测试成本，对客户端的使用产生了一定的影响。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术中的上述问题，提供一种定量检测D-二聚体的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种定量检测D-二聚体的免疫荧光层析试剂盒，包括试纸条和壳体；试纸条包括PVC底板，在PVC底板的板面上沿其长度方向顺次设有样本垫、过滤膜、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维膜上由标记垫向吸水垫一侧依次设有第一定量带、第二定量带、质控带，且第一定量带、第二定量带和质控带沿硝酸纤维素膜的长度方向等距布置；壳体上依次设有加样口、观察窗和条形码；PVC底板和硝酸纤维素膜具有低荧光特性；标记垫含有D-二聚体捕获抗体标记的荧光微球标记物和山羊抗鸡单克隆抗体标记的荧光微球标记物；第一定量带和第二定量带均包被D-二聚体检测抗体；质控带包被鸡IgY抗体；荧光微球的发射波长为400～500nm，且其粒径为50～150nm。

一种上述定量检测D-二聚体的免疫荧光层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

S1、将荧光微球活化；

S2、将活化的荧光微球分别与抗体A和抗体B进行偶联，加入封闭液反应，加入储存液避光保存，得到抗体A标记的荧光微球标记物和抗体B标记的荧光微球标记物；抗体A为D-二聚体捕获抗体，抗体B为山羊抗鸡单克隆抗体；

S3、用稀释液将S1步骤所得的抗体A标记的荧光微球标记物和抗体B标记的荧光微球标记物分别稀释，再混合，将其均匀喷涂于标记垫上，干燥保存；

S4、稀释抗体C和抗体D，将稀释后的抗体C喷涂在硝酸纤维素膜上制成第一定量带和第二定量带，稀释后的抗体D喷涂在硝酸纤维素膜上制成质控带，将硝酸纤维素膜恒温干燥并装袋；抗体C为D-二聚体检测抗体，抗体D为鸡IgY抗体；

S5、在PVC底板上依次粘贴硝酸纤维素膜、标记垫、过滤膜、样本垫和吸水垫，样本垫、过滤膜、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫沿PVC底板长度方向的首尾之间至少部分互相搭接，然后切割成试纸条并组装在壳体中，将其干燥后密封；