[发明专利]一种细胞培养基质

说明书

本发明解决了目前细胞培养基质不能完全模拟细胞生长微环境的问题，提供了一种最接近人体细胞生长所需微环境的基质，有利于体外细胞的培养和分化，一种细胞培养基质，其特征在于，包括：10‑30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5‑10wt％脱细胞羊膜基质、60‑80wt％胶原蛋白I型。

技术领域

本发明涉及生物材料领域，具体涉及一种细胞培养基质。

背景技术

细胞培养技术已广泛应用于科研、生产和临床应用,正在发挥着日益重要的作用。细胞培养中除了对培养容器、培养基、温度、溶氧和pH等有精确的要求外，用于对支持细胞贴壁生长的细胞培养基质载体有着更高的要求。细胞培养基质载体对获得优异的科研、生产和临床应用效果起着关键作用，对于优质高效的细胞培养基质载体，有着越来越紧迫的需求。传统的细胞培养基质材料主要包括天然、合成和半合成材料。天然材料由于具有良好的细胞相容性，为目前主要研究对象。细胞培养过程要求能尽量模拟体内生长所需要的微环境，尤其是生物微环境。近年来人们主要应用胶原蛋白、Matrigel等基质进行细胞培养，相对于合成材料而言，这些材料在生物活性成分上有了一定改进，在科研、生产和临床应用中都获得了一定的效果。但是考虑到人体微环境的复杂性，这些细胞培养基质材料在模拟生物微环境方面，距离理想的生物微环境尚远，仍有很大的提升空间。

以Matrigel为例，Matrigel是由富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离获得，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等组成，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。一方面matrigel来源于小鼠肿瘤组织，可能具备一定的肿瘤组织特异性成分，另一份其生物活性成分不够丰富，难以很好地模拟细胞生长所需要的微环境。因此，发明人认为，目前还缺乏一种能够较完全模拟细胞体内生长微环境的基质产品用于细胞的体外培养。

发明内容

本发明解决了目前细胞培养基质不能完全模拟细胞生长微环境的问题，提供了一种最接近人体细胞生长所需微环境的基质，有利于体外细胞的培养和分化。

根据本发明的第一个方面，提供了一种细胞培养基质，其特征在于，包括：10-30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5-10wt％脱细胞羊膜基质、60-80wt％胶原蛋白I型。

进一步地，所述的小肠粘膜来源包括：猪、牛、羊。

进一步地，所述的脱细胞小肠粘膜下层基质与脱细胞羊膜基质的制备方法包括以下步骤：

步骤一：化学萃取，取动物小肠粘膜下层/羊膜，依次使用Triton X100、脱氧胆酸钠水溶液对其进行化学萃取，用蒸馏水漂洗后冻干；

步骤二：粉碎消化，冻干后使用迷离粉碎机粉碎，获得脱细胞猪小肠粘膜下层基质粉末，将粉末置于胃蛋白酶的盐酸溶液中消化，其中，基质粉末与胃蛋白酶的质量比为10:1，直至基质粉末溶液变为均匀、半透明态；

步骤三：冻干，超速离心除去未消化的颗粒物，得到的消化液在-40℃下冻存，冷冻干燥后获得脱细胞小肠粘膜下层/羊膜基质。

根据本发明的第二个方面，提供了一种细胞培养基质，其特征在于，由80wt％的胶原蛋白I型、10wt％的脱细胞猪小肠粘膜下层基质和10wt％的脱细胞羊膜基质组成。

本发明的有益效果如下：

(1)本发明相对于现有细胞培养基质具有丰富的细胞生长所需各种生长因子，利用细胞粘附、增殖；

(2)本发明相对于现有细胞培养基质具有具有促血管化再生的生长因子，利用后期组织培养的血管再生；

(3)本发明相对于现有细胞培养基质含有具有免疫特性脱细胞羊膜基质，利于组织培养及临床应用。

附图说明