[发明专利]一种构建ACPA阳性合并骨侵蚀类风湿关节炎动物模型的方法

说明书

本发明涉及一种构建ACPA阳性合并骨侵蚀类风湿关节炎动物模型的方法，其包括以下步骤：在动物模型构建周期内，每天在小鼠口腔牙龈区涂抹牙龈卟啉单胞菌混悬液；将牛二型胶原蛋白溶液和完全弗氏佐剂等体积混合乳化成乳浊液，在构建周期内，在小鼠尾根部皮下注射所述乳浊液进行两次免疫，建模周期结束，得到所述的动物模型。采用本发明构建的动物模型能够稳定高表达抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)，与现有动物模型相比，该方法能有效构建发病率和严重程度更高且伴随严重骨侵蚀的RA动物模型。从而降低了难治性类风湿关节炎相关研究的技术难度，为进一步广泛开发RA的治疗手段提供了坚实的技术基础。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种构建ACPA阳性合并骨侵蚀类风湿关节炎动物模型的方法。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是世界性、难治性、全身性的自身免疫疾病，其重要免疫学特征是产生抗瓜氨酸化蛋白抗体(anti-citrullinated proteinantibodies，ACPA)等。ACPA是存在于47～84％RA患者体内的一类高度特异性抗体，2010年被美国风湿病学会和欧洲抗风湿病联盟纳入RA的血清学诊断标准。其可出现于RA临床症状之前，与疾病发生、发展和预后密切相关。研究显示，与ACPA阴性相比，ACPA阳性RA患者最显著的临床特点是严重的关节骨侵蚀，且疾病活跃度更强、心血管疾病并发症发生率更高及预后更差等临床表现，其治疗也更困难。甚至已经有研究认为ACPA阳性和ACPA阴性RA是两种机制不同的疾病。因此，明确ACPA阳性RA的发病机制和靶向ACPA治疗是RA领域研究热点。

建立实验动物模型是研究发病机制及研发创新药物的重要基础。虽然RA动物模型如胶原诱导型关节炎和佐剂诱导型关节炎等能非常好地模拟RA的临床症状和病理特征，但ACPA并不是这些模型的显著特征。因此，上述RA动物模型并不能完全反映人类RA在关节炎表现、免疫学、病理学等方面的特点，更无法阐明自身抗体在人类RA免疫炎症反应的启动和维持过程中的机制，这严重影响了ACPA诱导的发病机制和靶向ACPA治疗药物的深入研究，因此我们需要建立一种ACPA稳定高表达的动物模型。

ACPA具有高度的交叉反应性，它们与多种瓜氨酸化蛋白结合，但体内相关的靶抗原及其组织定位尚不清楚。有研究者采用瓜氨酸化蛋白免疫构建ACPA阳性RA模型，但发病率和严重程度低，提示单一的瓜氨酸化蛋白不能有效建立ACPA阳性RA模型。而牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，pg)表达的肽基精氨酸脱亚胺酶能够瓜氨酸化几乎全部的RA主要抗原蛋白。已有研究表明,路易斯大鼠每天口腔接种含pg的羧甲基纤维素钠凝胶8个月可诱导自发性RA，且在四个月时出现ACPA明显高表达，但该类造模方式造模周期长，发病率和严重程度低，不利于推广和应用。也有研究者在DBA小鼠背外侧植入一个线圈室，2周后细菌接种到内腔中，尾部皮下注射CFA乳化的CII，21天后，再用等量CII强化免疫，也能建立ACPA高表达模型，但该类模型造模难度和动物死亡率较高。

另外，发明人在长期的研究过程中发现造模方式和动物种属对模型的建立极为关键，常规的动物往往难以出现显著ACPA高表达。

发明内容

为了解决上述的至少一个技术问题，更好地研究RA相关的发病机制、药物，减轻患者的痛苦，本发明提供了一种构建ACPA阳性合并骨侵蚀类风湿关节炎动物模型的方法。

第一方面，本发明提供了一种构建ACPA阳性合并骨侵蚀类风湿关节炎动物模型的方法。所述方法包括以下步骤：

在动物模型构建周期内，每天在小鼠口腔牙龈区涂抹牙龈卟啉单胞菌混悬液；

将牛二型胶原蛋白溶液和完全弗氏佐剂等体积混合乳化成乳浊液，在所述构建周期内，在小鼠尾根部皮下注射所述乳浊液进行两次免疫，建模周期结束，得到所述的动物模型。

优选地，所述小鼠为DBA/1、B10、C57BL/6、C3H/He中的任意一种，更优选为C3H/He。