[发明专利]用于诊断胆道闭锁的胶体金快速检测卡及其制备方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域，公开了一种用于诊断胆道闭锁的胶体金快速检测卡，所述检测卡包括顺次搭接粘贴于底板上的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，金标结合垫上吸附有胶体金标记的检测抗体，硝酸纤维素膜上由样品垫端至吸水垫端依次设有相互平行的检测线和质控线，检测线包被有捕获抗体，质控线包被有抗鼠二抗；检测抗体和捕获抗体均为抗MMP‑7单克隆抗体。本发明可用于对人血清/血浆或全血样本中MMP‑7的快速检测，其结构简单、操作方便、灵敏度高、结果容易判读，与胆道闭锁临床诊断金标准方法一致性良好，适于现场对胆道闭锁患者的快速筛查和辅助诊断。本发明还公开了上述用于诊断胆道闭锁的胶体金快速检测卡的制备方法。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地涉及一种用于诊断胆道闭锁的胶体金快速 检测卡，本发明还涉及这种检测卡的制备方法。

背景技术

胆道闭锁(Biliary Atresia，BA)是严重威胁婴幼儿生命的胆道梗阻性疾病。目前认为该病主要由病毒引起，导致继发性的肝内外胆管梗阻、肝纤维化，直至形成肝硬 化并严重危及患儿生命，其确切的病理生理学机制尚未完全明确。如果得不到及时治疗， 进展性肝硬化会造成多数患儿在2岁内死亡。肝门肠吻合术(Kasai术)是目前治疗胆 道闭锁的主要方式，但手术时患儿的年龄起关键作用，手术成功率与患儿手术时的年龄 呈负相关。如能早期明确诊断并且施行手术可显著改善BA患儿预后，否则预后大多不 良，因此，对胆道闭锁做出早期诊断尤为重要。

现在对胆道闭锁的早期诊断尚缺乏行之有效的方法，只能依靠多项指标联合诊断， 过程繁琐费时耗力，大多数患儿在出生60天后才得以确诊，但已错过最佳治疗时机。目前，有助于胆道闭锁早期诊断的筛查方法还在研究中，如血清胆汁酸、直接胆红素、 尿硫酸化胆汁酸、胆红素检测、肝活检、粪便比色卡和各种影像学方法等。其中术中胆 道造影及肝脏组织病理活检是诊断胆道闭锁的金标准，但是创伤较大、操作复杂、费用 高，难以应用于临床早期筛查。这些方法在有效性、灵敏度和特异性等方面尚未得到充 分评价或比较。因此，急需非损伤性的、特异性和敏感性高的指标和方法，实现对新生 儿胆道闭锁的快速、经济、有效的筛查和诊断。

有研究通过对BA/非BA胆汁淤积患儿进行细胞因子、趋化因子在内的120余种血清分析物和蛋白酶检测后发现，与非BA胆汁淤积患儿的对照组相比，有17种分析物表达 呈现明显的差异，其中差异最大的为基质金属蛋白酶7(MMP-7)。此外，在BA患儿中 检测出MMP-2、MMP-7、MMP-9、MMP-13等的表达，发现与同年龄无肝胆疾病的患儿相比， 仅MMP-2及MMP-7的表达量增高，且MMP-7的表达是MMP-2的4倍以上。因此，以MMP-7 作为诊断胆道闭锁血清标志物具有巨大潜力和应用前景。

胶体金检测方法相较于现有的胆道闭锁诊断金标准方法以及基于免疫学原理的酶 联免疫吸附法，克服了需借助昂贵仪器设备、对检验操作人员专业要求高、检测过程繁琐耗时、病人需遭受创伤痛苦和承受较大经济负担等劣势。但是，目前获取快速灵敏、 特异性高的基于MMP-7的胆道闭锁诊断胶体金检测卡还存在技术上的难题。

发明内容

针对现有技术的上述缺陷，本发明的第一目的在于提供一种用于诊断胆道闭锁的胶 体金快速检测卡，它解决现有的胆道闭锁诊断方法对仪器设备、检测人员专业要求高、检测过程繁琐、耗时等问题。

本发明的第二目的在于提供上述用于诊断胆道闭锁的胶体金快速检测卡的制备方 法。

为实现本发明的第一目的，本发明采用了如下的技术方案，一种用于诊断胆道闭锁 的胶体金快速检测卡，包括免疫胶体金试纸条，所述免疫胶体金试纸条包括顺次搭接粘贴于底板上的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫上吸附有 胶体金标记的检测抗体，所述硝酸纤维素膜上由样品垫端至吸水垫端依次设有相互平行 的检测线和质控线，所述检测线包被有捕获抗体，所述质控线包被有检测抗体，所述的 检测抗体为抗鼠二抗；