[发明专利]无帽线性且无修饰尿苷的mRNA技术平台

权利要求书

1.一种无帽mRNA，其由a、b、c区域依次连接形成线性结构；所述a、b、c区域分别由腺嘌呤核糖核苷酸、鸟嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸中的至少一种组成；其中，

a为5'非编码区，其含内部核糖体进入位点序列，所述内部核糖体进入位点序列用于介导核糖体亚基的内部进入从而指导所述mRNA进行翻译；

b为编码区，其用于转录形成蛋白质，所述蛋白质的基因序列为A~C的任一种：

A.II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白胞外域基因gD^ED，序列如SEQ ID NO：1所示；

B.II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白截短基因gD^FR，序列如SEQ ID NO：2所示；

C.新型冠状病毒S蛋白Delta毒株突变基因S^δT，序列如SEQ ID NO：3所示；

c为poly A片段区，其用于调节所述mRNA的翻译效率及增强所述mRNA的稳定性。

2.一种重组质粒，其转录可获得权利要求1所述的无帽mRNA，其中，所述重组质粒为A~C的任一种：

A.包含的目的基因为II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白胞外域基因gD^ED，序列如SEQ IDNO：1所示；

B.包含的目的基因为II型单纯疱疹病毒的D型囊膜蛋白截短基

因gD^FR，序列如SEQ ID NO：2所示；

C.包含的目的基因为新型冠状病毒S蛋白Delta毒株突变基因S^δT，序列如SEQ ID NO：3所示。

3.一种mRNA-LNP，其中所述mRNA-LNP中的mRNA为权利要求1所述的无帽mRNA。

4.根据权利要求3所述的mRNA-LNP，其中所述mRNA-LNP中的LNP为辛酸，8-[（2-羟乙基）[6-氧基-6-（十一烷氧基）己基]氨基]]，1-辛基壬基酯和Lipid-1脂质的至少一种，其中Lipid-1脂质的化学结构如式I所示。

5.权利要求3所述mRNA-LNP的构建方法，其包括：

将阳离子脂质化合物及辅助分子按比例溶解在乙醇中制备得到乙醇相；

将权利要求1所述的无帽mRNA溶于醋酸钠缓冲液并与乙醇相按比例混合,获得mRNA-LNP混合液；

浓缩、过滤除菌，获得所述mRNA-LNP。

6.根据权利要求5所述的构建方法，所述阳离子脂质化合物为权利要求4中所述LNP；所述辅助分子为二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇及DMG-1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000。

7.根据权利要求5所述的构建方法，其中所述阳离子脂质化合

物及辅助分子在乙醇相混合的摩尔比例为阳离子脂质化合物：二硬脂酰磷脂酰胆碱：胆固醇：1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000为50∶10∶38∶2。

8.权利要求1所述无帽mRNA、权利要求2所述重组质粒、权利要求3或4所述mRNA-LNP或权利要求5~7任一项所述构建方法获得的mRNA-LNP在制备疫苗或药物的应用。

9.一种疫苗或药物，其包含权利要求3或4任一项所述mRNA-LNP或权利要求5~7任一项所述构建方法获得的mRNA-LNP以及药学上可接受的辅料。