[发明专利]一种基于红豆杉原料的菌种包及其制备方法、应用

说明书

本发明涉及菌种包生产技术领域，更具体的说，它涉及一种基于红豆杉原料的菌种包及其制备方法、应用。本发明将红豆杉与麦麸混合，再加入硝酸钾，磷酸氢钾、硫酸锌、硝酸铜和氯化铁，灭菌后进行装袋，制成基于红豆杉原料的菌种包。本发明通过在菌种包中添加红豆杉原料，提高了内生真菌产生紫杉醇的含量，并以此为基础对内生真菌进行选育。

技术领域：

本发明涉及菌种包生产技术领域，更具体的说，它涉及一种基于红豆杉原料的菌种包及其制备方法、应用。

背景技术：

红豆杉树叶、枝、皮、根含紫杉醇。

但是由于紫杉醇在红豆杉植物体中含量较低，并且红豆杉在自然条件下生长缓慢，再生能力差，所以红豆杉的数量也不足以满足市场需求。目前对紫杉醇的生产，主要有人工合成、植物细胞培养，人工合成步骤繁琐，难度大，并且半合成中的前体物质仍然是从红豆杉中提取；植物细胞培养产量低，并且合成花费高。

最近通过研究发现，红豆杉的内生真菌也可以产生紫杉醇，并且红豆杉中的某些物质可以提高内生真菌的紫杉醇产量，为了提高内生真菌产生紫杉醇的含量，现提供一种基于红豆杉原料的菌种包及其制备方法、应用。

发明内容

本发明提供一种基于红豆杉原料的菌种包及其制备方法、应用，以进一步研究红豆杉中的某些物质可以提高内生真菌的紫杉醇产量这一特点。

本发明提供一种基于红豆杉原料的菌种包的制备方法，包括如下步骤：

S1：将红豆杉根、茎和嫩叶先洗净，再进行粉碎，并过120目的筛；

S2：将粉碎后的红豆杉原料进行冷冻干燥；

S3：将40-60份粉碎后的红豆杉，40-60份麦麸，1-3份硝酸钾， 0.1-0.5份磷酸氢钾、0.1-0.5硫酸锌、0.1-0.5硝酸铜、0.1-0.5氯化铁，0.1-0.5份L-酪氨酸混合均匀，制得混合物C；

S4：将上述混合物C和菌种袋进行灭菌；

S5：在无菌空气下，将混合物C装入菌种袋中；

S6：将产紫杉醇内生真菌接种至混合物料中，再将菌种袋进行封口，制得基于红豆杉原料的菌种包。

进一步地，所述步骤S3具体包括如下步骤：

S3.1：将40-60份粉碎后的红豆杉，40-60份麦麸在滚筒式搅拌机中进行混合，得到混合物A；

S3.2：将1-3份硝酸钾，0.1-0.5份磷酸氢钾、0.1-0.5硫酸锌、 0.1-0.5硝酸铜、0.1-0.5氯化铁，0.1-0.5份L-酪氨酸溶于适量去离子水中，搅拌均匀，得到混合物B；

S3.3：将混合物B注入混合物A中，搅拌均匀；

S3.4：将步骤S3.3混合的物料进行冷冻干燥，控制游离水含量在25％以下，制得混合物C。

进一步地，所述步骤S3.2中，向混合物B中加入0.1-0.5份苯甲酸钠。

进一步地，所述步骤S4具体包括如下步骤：

S4.1：将上述混合物C和菌种袋分别置于不同反应釜内部，让装有混合物C的反应釜不断转动；

S4.2：向反应釜内部不断通入环氧乙烷与氮气混合的气体对混合物C和菌种袋进行灭菌；

进一步地，所述步骤S4.2中的环氧乙烷与氮气的比例为1:9。

进一步地，所述步骤S5中，具体包括如下步骤

S5.1：将混合物C装袋时，同时将干冰间隔装入混合物C中；