[发明专利]一种正相色谱法测定保护氨基酸对映异构体的方法

权利要求书

1.一种正相色谱法测定保护氨基酸对映异构体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品配制：

供试品溶液制备：精密称取供试品10mg，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至

刻度线，摇匀，即得；

对照品溶液制备：精密称取保护氨基酸对映异构体，用稀释剂溶解并稀释成浓度为

0.03mg/ml的溶液，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1ml，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得；

灵敏度溶液制备：精密量取对照品溶液1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得；

系统适用性溶液制备：精密称取供试品10mg，置20ml量瓶中，加入对照品贮备液1ml，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

（2）色谱条件设置：

色谱柱：直链淀粉-三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）手性固定相为色谱柱；

流动相：正己烷-无水乙醇-三氟乙酸，体积比为（75~90）:（10~25）: 0.1；

柱温：30~45℃；

流速：0.3~1.0ml/min；

进样体积：5~20µl；

检测波长：210~270nm；

（3）检测和计算：

精密量取系统适用性溶液，灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；通过外标法计算主峰和对映异构体的峰面积。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为无水乙醇和正己烷的混合溶液，其中无水乙醇和正己烷体积比为60：40。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱温设置为39~41℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述灵敏度溶液中，峰高的信噪比大于10。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述保护氨基酸选自Ac-D-2-Nal-OH、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH中的一种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述保护氨基酸选自Ac-D-2-Nal-OH时，其色谱条件设置：流动相：正己烷-无水乙醇-三氟乙酸，体积比为90:10:0.1；流速为0.8ml；波长为264nm。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述保护氨基酸选自Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH时，其色谱条件设置：流动相：正己烷-无水乙醇-三氟乙酸，体积比为85:15:0.1；流速为1.0ml；波长为264nm。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述保护氨基酸选自Fmoc-Arg(Pbf)-OH时，其色谱条件设置：流动相：正己烷-无水乙醇-三氟乙酸，体积比为75:25:0.1；流速为1.0ml；波长为220nm。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述保护氨基酸选自Fmoc-D-Ala-OH时，其色谱条件设置：流动相：正己烷-无水乙醇-三氟乙酸，体积比为80:20:0.1；流速为0.3ml；波长为264nm。

10.利用权利要求1~9任一项所述方法测定醋酸西曲瑞克起始原料药中保护氨基酸的含量，其特征在于，所述保护氨基酸选自Ac-D-2-Nal-OH、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH中的一种，其对映异构体的含量不高于0.3%。