[发明专利]一种反相色谱法测定保护氨基酸对映异构体的方法

权利要求书

1.一种反相色谱法测定保护氨基酸对映异构体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品配制：

供试品溶液制备：精密称取供试品10mg，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至

刻度线，摇匀，即得；

对照品溶液制备：精密称取保护氨基酸对映异构体，用稀释剂溶解并稀释成浓度为

0.05mg/ml的溶液，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液2ml，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得；

灵敏度溶液制备：精密量取对照品溶液1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度线，摇匀，即得；

系统适用性溶液制备：精密称取供试品10mg，置20ml量瓶中，加入对照品贮备液2ml，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

（2）色谱条件设置：

色谱柱：纤维素-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）手性固定相为色谱柱；

流动相：以水-乙腈-甲酸（70：30：0.1）为流动相A，乙腈-水（90：10）为流动相B进行梯度洗脱；

柱温：25~40℃；

流速：0.3~1.5ml/min；

进样体积：5~20µl；

检测波长：260~270nm；

（3）检测和计算：

精密量取系统适用性溶液，灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；通过外标法计算主峰和对映异构体的峰面积。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稀释剂为无水乙醇和水的混合溶液，其中无水乙醇和水体积比为50：50。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按照下表进行梯度洗脱：

时间（min）	流动相A(%)	流动相B(%)
0	100	0
20	100	0
21	0	100
30	0	100
31	100	0
40	100	0

。