[发明专利]一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）利用柠檬酸钠溶液还原氯金酸溶液制备金纳米颗粒溶液，将金纳米颗粒溶液稀释后加入核酸适配体混匀并进行反应，将反应后的溶液稀释，得到核酸适配体-金纳米颗粒溶液；

（2）配制一定浓度梯度的马拉硫磷标准溶液，分别与步骤（1）的核酸适配体-金纳米颗粒溶液混合并进行反应，然后加入NH₂OH混匀，再分次加入氯金酸溶液使金纳米颗粒生长完成，得到不同浓度的马拉硫磷标准品；

（3）记录步骤（2）不同浓度的马拉硫磷标准品的颜色，制作比色卡，用于马拉硫磷的批量定性检测；

（4）对步骤（2）不同浓度的马拉硫磷标准品进行拉曼光谱分析，将标准品1270 cm^-1处拉曼信号峰强度I₁₂₇₀与马拉硫磷浓度的对数lgC 拟合建立标准曲线，得到标准曲线的线性方程，用于马拉硫磷的定量检测；

（5）重复步骤（2）的操作并用待测溶液代替步骤（2）中的马拉硫磷标准溶液，得待测样品，将待测样品重复步骤（3）和/或步骤（4）的操作，实现待测溶液中马拉硫磷的定性检测和/或定量检测。

2.根据权利要求1所述的一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）的金纳米颗粒溶液中金纳米颗粒的粒径为5~15nm，浓度为7~8nM。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中金纳米颗粒溶液稀释的浓度倍数为10倍；核酸适配体的浓度为1μM、体积为10~20μL。

4.根据权利要求3所述的一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法，其特征在于：所述核酸适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其5’端修饰有巯基。

5.根据权利要求4所述的一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中反应的条件为室温下反应20~24h；反应后的溶液稀释后的体积为200μL。

6.根据权利要求5所述的一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中不同浓度的马拉硫磷标准品的浓度分别为0 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1 µM、10 µM、100 µM、10 mM及10 mM，体积为20~40μL；NH₂OH的浓度为500 mM、体积为10~20μL；氯金酸溶液的质量分数为0.01%，体积为20~40μL。

7.根据权利要求6所述的一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中不同浓度的马拉硫磷标准溶液与步骤（1）的核酸适配体-金纳米颗粒溶液进行反应的条件为室温下反应5~10h；金纳米颗粒生长的条件为室温下生长5~10min。

8.根据权利要求7所述的一种比色/SERS双模式批量检测马拉硫磷的检测方法，其特征在于：所述步骤（4）中标准曲线的线性方程为I₁₂₇₀=-737.1 lgC+397.6，线性拟合系数为0.9871，均方根误差为176.2。

9.权利要求1、2、4-8任一项所述的检测方法在批量定性和/或定量检测马拉硫磷中的应用。

10.根据权利要求9所述的批量定性和/或定量检测马拉硫磷的应用，其特征在于：定性检测马拉硫磷的检测范围为0nM~10mM；定量检测马拉硫磷的线性范围为1nM~100µM，检出限为0.7nM。