[发明专利]一种视网膜色素变性疾病模型的构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种视网膜色素变性疾病模型的构建方法和应用，涉及医学工程技术领域。其包括：敲除非人目标哺乳动物视网膜视杆细胞基因组中的Ythdc2基因序列获得视网膜色素变性疾病模型。该疾病模型表现出视网膜色素变性疾病相关的特征。例如视杆细胞死亡，主要表现为光感受器受损、变性，视网膜外核层逐渐变薄直至消失，视网膜外网层及其他相关细胞层出现相应病理改变。因此，视网膜视杆细胞中的Ythdc2基因被敲除的动物可以作为视网膜色素变性疾病模型，用于视网膜色素变性疾病研究等领域中，为该疾病的研究例如发病过程、机制以及相关预防或治疗药物的筛选提供一种新的模型。

技术领域

本发明涉及医学工程技术领域，具体而言，涉及一种视网膜色素变性疾病模型的构建方法和应用。

背景技术

视网膜色素变性(Retinitispigmentosa,RP)是一种进行性、遗传性，营养不良性的视网膜退行性变。RP作为一种遗传性致盲眼底病，根据临床表型可分为两类：典型RP患者表现为视杆细胞普遍受损，约占RP患者的80％-90％；而只占RP患者10％-20％的非典型RP，则主要以视锥细胞受损为主。典型的RP患者最早由于视杆细胞功能缺陷而出现夜盲和进行性视野损害，逐步发展为管状视野，直至失明。在病理学方面，典型的RP主要影响视杆细胞，造成视杆细胞死亡并继发视锥细胞死亡，表现为感光细胞受损、变性，视网膜外核层逐渐变薄直至消失，伴随视网膜其他相关细胞层出现相应病理改变。

RP在中国人群的发病率高达1/3500。而目前，针对RP的诊断和治疗依然面临许多困难，这主要归因于其在临床表型和遗传上具有高度的异质性，并且针对其病理机制系统研究不足，导致RP的具体分子机制尚不清楚，这为RP的临床诊断和治疗带来极大阻碍，因此有必要开发新的疾病模型，对RP的详细致病机制进行深入研究。而目前，缺乏相应的RP疾病模型。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种视网膜色素变性疾病模型的构建方法和应用以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种视网膜色素变性疾病模型的构建方法，其包括：敲除非人目标哺乳动物视网膜视杆细胞基因组中的Ythdc2基因序列。

YTHDC2(YTHDomainContaining2，MGI:2448561)，该基因位于小鼠18号染色体44961521-45022787bp，全长61.26kb，其cDNA全长6299bp，包含30个外显子。

YTHDC2作为RNA中m6A甲基化的阅读蛋白，识别RNA的甲基化位点并进行进一步的调控，其广泛分布于各种类型的组织细胞中。m6A甲基化是一个动态可逆的过程，其形成过程主要是由甲基转移酶复合体(METTL3,METTL14和WTAP等组成)，而去甲基化过程则是由去甲基酶(FTO和ALKBH5)来完成，阅读蛋白(YTHDF1-3,YTHDC1/2,IGF2BP1-3等)主要负责识别甲基化位点并进行动态调控，与基因表达调控密切相关。其次，m6A可能参与了mRNA转录、选择性剪切、出核转运、翻译以及降解等生物学过程,从而导致RNA功能紊乱，进而影响一系列的动物生命活动。目前针对YTHDC2蛋白功能的研究逐渐增多，包括在肿瘤发生、机体发育等方面的影响，但其详细作用机制以及其在视网膜中的生物学功能还不甚明了，限制了其开发应用。因此，深入研究YTHDC2对视网膜色素变性疾病的治疗及病因探讨潜力巨大。

发明人研究发现，在将目标动物视杆细胞中的Ythdc2基因敲除，可以使得目标动物表现出视网膜色素变性疾病相关的特征。例如视杆细胞死亡，主要表现为光感受器受损、变性，视网膜外核层逐渐变薄直至消失，视网膜外网层及其他相关细胞层出现相应病理改变。因此，视网膜视杆细胞中的Ythdc2基因被敲除的动物可以作为视网膜色素变性疾病模型，用于视网膜色素变性疾病研究等领域中，为该疾病的研究例如发病过程、机制以及相关药物的筛选提供一种新的模型。