[发明专利]提高成纤维细胞分泌活性因子水平的组合物及方法与应用

说明书

本发明公开了一种提高成纤维细胞分泌活性因子水平的组合物，由以下物质组成：环磷酸腺苷5‑100ng/ml；维甲酸10‑180ng/ml；β‑巯基乙醇100‑3000μmol/L；二甲基亚砜10‑2000μmol/L；余量为α‑MEM培养基。提高成纤维细胞分泌活性因子水平的方法，包括：(1)将成纤维细胞平铺在六孔板上，细胞生长密度达到80％以上，且细胞生长状态良好，细胞存活率95％；(2)、配置上述组合物；(3)、组合物混合均匀，将上清吸出，用PBS缓冲液反复洗涤3次，将PBS缓冲液残余液吸干，贴六孔板的孔板壁缓慢加入组合物，将六孔板放入培养箱内，在CO₂的浓度为5％，37℃下培养72小时。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种提高成纤维细胞分泌活性因子水平的组合物及方法与应用。

背景技术

皮肤是人体面积最大的器官，由真皮和表皮构成。真皮位于表皮的深面，在真皮网织层中的主要细胞是成纤维细胞(fibroblasts，Fbs)，它能合成和分泌大量的胶原蛋白以及少量的弹性蛋白,随着年龄的增长，由于生理或病理因素，新陈代谢的平衡被破坏，皮肤Fbs抗酶破坏力降低，数量不断减少，胶原纤维和弹性纤维的数量和质量也随之减少，真皮层结构发生改变，真皮层厚度慢慢变薄，弹性变差，逐渐衰老，皮肤干燥粗糙,皱纹增多、加深,皮肤松弛，弹性下降等。甚至在表情肌运动较多的部位因皮肤松弛产生了皱纹”。由此而知，成纤维细胞的减少是引起皱纹产生的重要原因。

有大量研究表明成纤维细胞分泌的：表皮生长因子(EGF)、重组人碱性成纤维细胞生长因子(AFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)、角质细胞生长因子(KGF)、血管内皮生长因子(VEGF)等多种因子对于抗衰老和促进肌肤修复、收敛毛孔、令肌肤柔嫩有弹性具有重要的作用。但是成纤维细胞分泌因子发挥作用的一个重要前提是需要维持有效的浓度，也就是说需要较高的分泌水平。

目前是利用脂肪来源的间充质干细胞进行诱导后用于修复皮肤，实现方式是用不同组合的诱导药物对细胞实施诱导。这种诱导方法是通过药物对细胞进行诱导后提高细胞分泌BFGF水平，但是通过诱导后提高分泌水平的因子种类比较单一，只提高了BFGF的分泌水平，并没有提升其他相关因子的分泌水平。虽然现在有使用脂肪来源的间充质干细胞修复疤痕和烧伤，但效果远远不如成纤维细胞的分泌因子用于修复的效果好。显然利用脂肪来源的间充质干细胞诱导后细胞因子分泌水平并不高，更不能达到长时间稳定地高水平分泌。另外由于采用低代次细胞，一般都会使用第3-4代的细胞，如果长期使用低代次或者原代细胞进行诱导，会造成可用于诱导使用的每单位原代细胞或低代次细胞数量非常有限。

发明内容

发明目的：本发明针对上述现有技术存在的问题做出改进，即本发明公开了一种提高成纤维细胞分泌活性因子水平的组合物及方法与应用。

技术方案：一种提高成纤维细胞分泌活性因子水平的组合物，由以下物质组成：

环磷酸腺苷5-100ng/ml；

维甲酸10-180ng/ml；

β-巯基乙醇100-3000μmol/L；

二甲基亚砜10-2000μmol/L；

余量为α-MEM培养基。

进一步地，由以下物质组成：

环磷酸腺苷15ng/ml；

维甲酸20ng/ml；

β-巯基乙醇100μmol/L；

二甲基亚砜10μmol/L；

余量为α-MEM培养基。

一种提高成纤维细胞分泌活性因子水平的方法，包括以下步骤：